微流控包封LNP-mRNA的流程为:① 制备含脂质组分的乙醇,和含mRNA的水相,将两相溶液分别转移至注射器中,去除气泡;② 将两个注射器接通至微流控设备;③ 设置微流控参数:总进样量、乙醇相和水相的流速、排废体积;④ 收集的样品经透析去除乙醇...
将mRNA与脂质快速混合,自组装形成LNP-mRNA颗粒。其中mRNA与总脂质的质量比约为0.05 (wt /wt),mRNA终浓度为1μg/μL。 经检测,mRNA-LNP的粒径约为80nm,保存在-80℃。 图2 脂质纳米颗粒(LNP)包封mRNA 03 抗体与LNP-mRNA 的偶联和检测 抗体预处理:...
冻干技术在低温真空下通过升华去除水分,可相对温和地将脆弱的生物大分子或胶体纳米颗粒制备成冻干制剂,已有研究显示该技术可满足mRNA-LNP在室温下的长期储存需求,并能维持复溶后的转染效力(瑞科吉生物早前就已发布全球首款冻干型mRNA疫苗的人体实验数据,证实了冻干mRNA疫苗复溶后可维持转染效力)。 近日,来自比利时根特...
微流控包封LNP-mRNA的流程为:① 制备含脂质组分的乙醇,和含mRNA的水相,将两相溶液分别转移至注射器中,去除气泡;② 将两个注射器接通至微流控设备;③ 设置微流控参数:总进样量、乙醇相和水相的流速、排废体积;④ 收集的样品经透析去除乙醇,最终保存在PBS缓冲液中。 图2微流控混合方法对应的LNP配方 03 SORT...
冻干技术在低温真空下通过升华去除水分,可相对温和地将脆弱的生物大分子或胶体纳米颗粒制备成冻干制剂,已有研究显示该技术可满足mRNA-LNP在室温下的长期储存需求,并能维持复溶后的转染效力(瑞科吉生物早前就已发布全球首款冻干型mRNA疫苗的人体实验数据,证实了冻干mRNA疫苗复溶后可维持转染效力)。
经检测,mRNA-LNP的粒径约为80nm,保存在-80℃。 图2 脂质纳米颗粒(LNP)包封mRNA 03 抗体与LNP-mRNA的偶联和检测 抗体预处理:用SATA (N-琥珀酰亚胺-S-乙酰巯基乙酸酯)对抗体进行功能化改造,引入巯基,用来偶联马来酰亚胺。随后用 0.5 M 羟胺去除反应中的 SATA,并通过 G-25 Sephadex去除未反应的组分。
脂质纳米颗粒(LNP)是mRNA药物常用的载体。目前,BioNTech/辉瑞和 Moderna的mRNA疫苗都采用LNP作为运输载体,这是这些疫苗成功的关键要素之一。 LNP是一种多组分系统,通常由可电离脂质或阳离子类脂质化合物、辅助脂质、胆固醇、保护剂聚乙二醇-脂质共轭物组成。 LNP结构组成:每种LNP都由4种辅料构成,包括可电离脂质(与mRNA...
除了mRNA 的完整性外,LNP 的稳定性对于 mRNA-LNP 疫苗的质量也至关重要。目前的mRNA疫苗没有披露关于LNP 稳定性测试的数据,但 Onpattro (patisaran) 的siRNA-LNP 制剂保存在2~8°C 之间时具有三年的有效期,同时该产品不能冷冻保存。 Onpattro 的LNP 系统的组成是:可电离的阳离子脂质DLin-MC3-DMA、DSPC、...
除了mRNA 的完整性外,LNP 的稳定性对于 mRNA-LNP 疫苗的质量也至关重要。目前的mRNA疫苗没有披露关于LNP 稳定性测试的数据,但 Onpattro (patisaran) 的siRNA-LNP 制剂保存在2~8°C 之间时具有三年的有效期,同时该产品不能冷冻保存。 Onpattro 的LNP 系统的组成是:可电离的阳离子脂质DLin-MC3-DMA、DSPC、...
当前mRNA脂质纳米粒(LNP)疫苗的一个缺点是它们必须在(超)di温下储存,了解这些疫苗不稳性的根本有助于我们合理提高mRNA-LNP产品的稳定性,从而降低对储存温度的要求。在这篇综述中,我们讨论了mRNA-LNP可能的内部结构、影响mRNA-LNP稳定性的因素以及优化mRNA-LNP产品稳定性的策略。对mRNA-LNP结构的分析表明,mRNA、可...