首先read1的测序引物结合到read1 sequencing primer处,启动测序,在流动槽中加入DNA聚合酶和可逆终止荧光dNTP(保证链延长时只结合一个dNTP),在read1的测序引物的3'端开始复制。一个碱基加入后会发出特征荧光信号,通过激光扫描,我们就能判断它是哪个碱基,从而推断原来模板链上的碱基是哪种。 当一个dNTP和模板链互补时...
gap filling:延伸并进行链置换: 加入index primer进行pcr扩增后: 测序引物: Read 1 sequencing primer:5'-TCGTCGGCAGCGTCAGATGTGTATAAGAGACAG-3'Read 2 sequencing primer:5'-GTCTCGTGGGCTCGGAGATGTGTATAAGAGACAG-3' nextera文库存在接头污染时: Forward filter:CTGTCTCTTATACACATCTCCGAGCCCACGAGAC Reverse filte...
4、Paired-end sequencing(即对Reverse strand测序) (1)洗脱index2测序产物后,以Flow cell上的P5’为引物,Forward strand为模板进行桥式扩增,得到双链 (2)NAOH使双链变性为单链,并洗去已经测序完成的Forward strand (3)类似的,read primer2结合到靠近P7’的read primer bi...
桥式结构)Paired End Sequencing双末端测序Original forward strand原始的正链Paired End Sequencing双末端测序Reverse strandTemplate反义链模板Blocked 3’-ends阻断3 ’端Sequencing primer测序引物Paired End Sequencing双末端测序Sequencing By Sy nthesis 2nd Read Read 2 边合成边测序Sequencing Paired End Libraries wi ...
Illumina sequencing and array technologies drive advances in life science research, translational and consumer genomics, and molecular diagnostics.
1. 利⽤转座⼦（transposome）对双链DNA进⾏剪切以及接头（adapter）的连接 2. 接头连接成功后，利⽤低循环扩增技术在接头处进⾏修饰，分别在两端添加sequencing primer binding site1/sequencing primer binding site2（即测序引物结合位点）、index1/index2以及我们称之P5和P7的寡核苷酸序列 上图并没有将...
TruePrepTMDual Index Sequencing Primer Box for Illumina®是TruePrepTMDNA Library Prep Kit for Illumina®专用测序引物试剂盒。试剂盒分为两种规格:TD301为单端测序专用测序引物试剂盒,包含Read 1测序引物R1、Index 1测序引物IX1以及Index 2测序引物IX2;TD302为双端测序专用测序引物试剂盒,包含Read 1测序引物R1...
四、Paried-end sequencing(即对Reverse strand测序) 1. 洗脱index2测序产物后,以Flowcell上的P5’为引物,Forward strand为模板进行桥式扩增,得到双链 2. NAOH使双链变性为单链,并洗去已经测序完成的Forward strand 3. 类似的,readprimer2结合到靠近P7’的read primer binding site 2开始对Reverse strand的测序。
目前我们主要分析的数据还是二代测序的数据,也就是大家经常挂在嘴边的NGS,而这其中最大的赢家应该算是illumina测序公司了,其经典的边合成边测序(sequencing by synthesis,SBS)巧妙地利用带不同荧光的dNTP来让碱基组成可视化,本身还是很有意思的。但随之而来的就有一些问题,比如以RNA-seq为例,如果你是一个经典的从表...
测序从第一个测序引物primer的延伸开始,生成第一个read(读段)。每一个核苷酸都带有荧光标记。四种核苷酸带有四个不同的荧光标记,发射出特征性的荧光信号,这个专有过程叫sequencing-by-synthesis.循环结束后,生成的read product被冲掉,在生成下一个read。整个过程生成数百万个reads,代表所有的fragment。