Co-IP和GST pull-down都是用于检测蛋白相互作用的实验,两者有很多相似之处,但在原理及实验操作上也存在一定的区别。 本文就Co-IP和GST pull-down在原理及操作流程上的区别做详细的讲解,同时结合文献案例给大家分享CoIP和GST pull-down实验结果的分析方法。 一、Co-IP/GST pull-down原理 Co-IP 基本原理 用某一...
2. GST pull-down可检测到利用啮齿动物细胞从组织中获得的细胞匀浆等,而CO-IP主要是进行蛋白免疫染色实验,并且其灵敏度也更高。 3. CO-IP通常只能采用单个抗体,用于检测特定的 相互作用 ,而GST pull-down使用基础载体蛋白质的普遍性使其不局限于特定的相互作用关 系 4. GST pull-down技术虽然是一种较为简单,...
GST-pull down和CoIP是常用的蛋白质相互作用研究技术,它们在生物科技和药物研发领域中起着重要的作用。GST-pull down和CoIP的主要区别如下: 1.原理: GST-pull down:GST-pull down是一种亲和纯化技术,利用谷胱甘肽S转移酶(GST)标记的蛋白质作为“鱼钩”,结合目标蛋白质的亲和结合区域,通过亲和纯化的方法将目标蛋白...
区别:GST pull-down一般用于体外实验,非生理状态下的验证,蛋白质的结构和形式可能与天然状态下存在一定差异,一般用于体外验证两个已知蛋白的直接相互作用。co-IP实验反映的是两个蛋白在体内或细胞水平的相互作用,因为在进行co-IP检测时,样本一般源于非变性裂解细胞,活细胞状态下蛋白质之间的相互作用被保持,所以其反映...
GST pull down和CO-IP(Co-immunoprecipitation)都是蛋白质相互作用的实验方法,但是它们的原理和应用场景略有不同。GST pull down是一种用于检测蛋白质相互作用的体外技术。该方法利用GST(谷胱甘肽S-转移酶)标记的蛋白质结合纯化的靶蛋白,然后用洗涤剂去除未结合的蛋白质。通过SDS-PAGE(聚丙烯酰胺凝胶电泳)和免疫印迹...
Co-IP,GST pull down和酵母双杂交是研究蛋白互做最常用的三种方法,一般常用酵母双杂交来筛选,用Co-IP和GST pull down用来验证。研究不仅在整体蛋白层面,还包括蛋白的结构域层面,GST pulldown是用来验证蛋白X与Y是直接结合的,而Y2H和Co-IP结果则还有间接作用以及非特异性作用。
GST pull-down一般用于体外实验,因为诱饵蛋白是需要加上GST标签的重组蛋白,所以是非生理状态下的验证,蛋白质的结构和形式可能与天然状态下存在一定差异,一般用于体外验证两个已知蛋白的直接相互作用。在实验难度上,重组诱饵蛋白一般采用原核表达体系,有高效的商业化载体(真核表表达体系也可以做,但需要找到合适的载体);并...
总体而言,GST pull-down和CoIP实验都是两种比较有效的蛋白互作验证方法,有各自的优势,但也有对应的局限,如果想要拿到一个漂亮并有说服力的实验数据,最好两种实验都能验证一下~ 如果您近期想做GST pull-down和CoIP,但又没有充足的时间,不妨找我们聊聊吧~ ...
免疫共沉淀(Co-IP)、GST Pull-Down与蛋白邻近标记技术各有其独特的优势和应用场景,但是也有其局限性。在某些方面这三种实验方法也是相互补充的,在进行研究时首先我们可以通过蛋白邻近标记技术来筛选互作蛋白,然后通过GST pull-down技术验证在体外蛋白质-蛋白质是否互作,最后利用免疫共沉淀(Co-IP)技术验证在体内蛋白质...