Co-IP和GST pull-down实验都是通过一种多组分的固相复合物将诱饵蛋白固定,随后富集靶标蛋白,从而确定靶标蛋白和诱饵蛋白互相作用的事实,整体思路是很类似的。不过由于固定诱饵蛋白的方法不同,二者在适用范围及实验难度上均有差异。 Co-IP 反映的是两个蛋白在体内或细胞水平的相互作用,因为在进行CoIP检测时,样本一般...
TOMM20的降低在前列腺癌向NEPC转化中扮演重要角色。通过CO-IP和GST pull-down实验分析验证TOMM20与AR蛋白质相互作用,AR拮抗剂恩杂鲁胺通过自噬-溶酶体途径降解TOMM20,导致细胞内ROS水平升高,激活PI3K/AKT通路,促进上皮-间质细胞转变(EMT),并上调干性分子及神经内分泌指标,最终导致耐药。 03蛋白邻近标记技术 原理 蛋...
通常全程实验温度为4℃,时间为2-4小时,但也需要根据实验情况可能需要调整。 ⑥co-IP能验证到互作,为什么GST pull-down却验证不到? Co-IP是体内实验,可能检测到基于其他蛋白作为桥梁的间接互作,而GST pull-down证明的是两个蛋白的直接相互作用,如果中间桥梁缺失,则不会呈现互作状态。 更多科研必备软件安装包 可以...
ip:ha ,表明是用ha标记的蛋白(arf-wt-ha)作为诱饵蛋白,使用ha抗体(anti-ha)作为诱饵蛋白抗体进行ip实验,而靶标蛋白则是带myc标签的蛋白(myc-exportin-5)。ip:ha部分有两张wb结果: ib:ha同样代表以ha抗体(anti-ha)对样本进行wb检测, ib:myc...
GST-pull down和CoIP是常用的蛋白质相互作用研究技术,它们在生物科技和药物研发领域中起着重要的作用。GST-pull down和CoIP的主要区别如下: 1.原理: GST-pull down:GST-pull down是一种亲和纯化技术,利用谷胱甘肽S转移酶(GST)标记的蛋白质作为“鱼钩”,结合目标蛋白质的亲和结合区域,通过亲和纯化的方法将目标蛋白...
· Co-IP能验证到互作,GST pull-down却验证不到:Co-IP是体内实验,可能检测到基于其他蛋白作为桥梁的间接互作,而GST pull-down证明的是体外两个蛋白的直接相互作用,如果中间桥梁缺失,则不会呈现互作状态. · 弱相互作用无法捕捉:增加孵育时间和降低洗涤强度,给弱相互作用留出更多机会被捕捉;尽量模拟体内条件,如使用...
#科研[超话]# GST pull-down与co-IP的区别 GST pull-down原理:把GSH与琼脂糖交联形成GSH琼脂糖珠,就能够将带有GST标签的诱饵蛋白固定,当体系中存在与诱饵蛋白有直接相互作用的靶标蛋白时,它就能够与琼脂糖珠...
Co-IP,GST pull down和酵母双杂交是研究蛋白互做最常用的三种方法,一般常用酵母双杂交来筛选,用Co-IP和GST pull down用来验证。研究不仅在整体蛋白层面,还包括蛋白的结构域层面,GST pulldown是用来验证蛋白X与Y是直接结合的,而Y2H和Co-IP结果则还有间接作用以及非特异性作用。
CoIP实验原理 CoIP，Co-Immunoprecipitation，即免疫共沉淀实验，它通过⼀种偶联有Protein A/G的琼脂糖 微珠或磁珠（Protein A/G能够特异性结合免疫球蛋⽩），将诱饵蛋⽩的抗体固定，随后再通过 该抗体固定诱饵蛋⽩，当与诱饵蛋⽩有相互作⽤的靶标蛋⽩与此固相复合物混合时就可被吸附 ⽽“沉淀”下来...
IP:HA部分有两张WB结果: IB:HA同样代表以HA抗体(anti-HA)对样本进行WB检测,IB:Myc同样代表以Myc抗体(anti-Myc)对样本进行WB检测。不同的是,此次检测的样本是经过IP处理之后的样本,通过条带7、8、9、10我们可以看见,当样本中存在ARF-WT-HA蛋白(条带8)时,通过CoIP实验就能将myc-Exportin-5蛋白(条带9)“...