GST pull-down一般用于体外实验,因为诱饵蛋白是需要加上GST标签的重组蛋白,所以是非生理状态下的验证,蛋白质的结构和形式可能与天然状态下存在一定差异,一般用于体外验证两个已知蛋白的 直接相互作用。在实验难度上, 重组诱饵蛋白一般采用原核表达体系,有高效的商业化载体(真核表表达体系也可以做,但需要找到合适的载体)...
2. GST pull-down可检测到利用啮齿动物细胞从组织中获得的细胞匀浆等,而CO-IP主要是进行蛋白免疫染色实验,并且其灵敏度也更高。 3. CO-IP通常只能采用单个抗体,用于检测特定的 相互作用 ,而GST pull-down使用基础载体蛋白质的普遍性使其不局限于特定的相互作用关 系 4. GST pull-down技术虽然是一种较为简单,...
CO-IP可以分为在目的细胞中的内源性IP和在工具细胞系(一般为293T)的外源性CO-IP。而GST-Pull down可作为在原核生物中表达的蛋白,已经完全脱离了细胞环境,只有真正有相互作用的蛋白才能被拉下来。 免疫共沉淀 …
GST-pull down:GST-pull down是一种亲和纯化技术,利用谷胱甘肽S转移酶(GST)标记的蛋白质作为“鱼钩”,结合目标蛋白质的亲和结合区域,通过亲和纯化的方法将目标蛋白质及其结合蛋白质从混合物中分离出来。 CoIP:CoIP是共免疫沉淀技术,利用抗体特异性地结合目标蛋白质,然后通过免疫沉淀的方法将目标蛋白质及其结合蛋白质从...
从两者的实验原理我们不难发现,GST pull-down和CoIP实验都是通过一种多组分的固相复合物将诱饵蛋白固定,随后富集靶标蛋白,从而确定靶标蛋白和诱饵蛋白互相作用的事实,整体思路是很类似的;不过由于固定诱饵蛋白的方法不同,二者在适用范围上,以及实验难度上均有差异。
然而,仅使用Co-IP,我们不能确定蛋白质相互作用是直接的还是间接的。通过靶蛋白抗体免疫共沉淀后,得到一种蛋白质复合物,它不仅含有与靶蛋白直接相互作用的蛋白质。 对于GST-pull down测试,我们可以在体外改变实验条件,以消除不相关蛋白质的影响。因此,我们可以很容易地确定目标蛋白质是否与被测蛋白质相互作用。
GST pull-down实验是一个行之有效的验证酵母双杂交系统的体外试验技术,近年来越来越受到广大学者的青睐。其基本原理是将靶蛋白-GST融合蛋白亲和固化在谷胱甘肽亲和树脂上,作为与目的蛋白亲和的支撑物,充当一种“诱饵蛋白”,目的蛋白溶液过柱,可从中捕获与之相互作用的“捕获蛋白”(目的蛋白),洗脱结合物后通过SDS-PAGE...
GST pull-down 蛋白质质谱鉴定 交联法蛋白相互作用分析 蛋白质结构鉴定 抗体测序 蛋白质圆二色谱分析 膜蛋白鉴定服务 序列分析 多肽测序 多肽从头测序 CO-IP免疫共沉淀法 Far-Western Blot分析 蛋白质一级结构的测定 蛋白质组学 定量蛋白质组学 Label-Free iTRAQ, TMT, SILAC 半定量蛋白质组学 2D-DIGE定量蛋白...
人生建议:认识的人越少越好,不要沾染不适合自己的圈子,知己一两个就足够,沉住气,别去巴结谁,别人的奇迹和你无关,得不到的不要去追,让自己生气的东西永远别搭理。 2 0 ñ6 +关注 湖南校园事儿 06月21日 09:23 每个人的童年都是值得人会回忆的。库洛牌,童年梦想。没事的时候可以在家...
从两者的实验原理我们不难发现,gst pull-down和coip实验都是通过一种多组分的固相复合物将诱饵蛋白固定,随后富集靶标蛋白,从而确定靶标蛋白和诱饵蛋白互相作用的事实,整体思路是很类似的;不过由于固定诱饵蛋白的方法不同,二者在适用范围上,以及实验难度...