实验组中加入的是GST融合蛋白,对照组是GST蛋白,实验组和对照组都加入His融合蛋白,目的是证明GST标签不会和His融合蛋白有相互作用。 Pull down 通过GSH Beads 沉淀GST蛋白或GST融合蛋白,如果GST融合蛋白能够拉下His融合蛋白,而GST不能拉下His融合蛋白,则说明A蛋白和B蛋白有相互作用 都拉下来或者都拉不下来则不能说明...
Anti-GST 代表以 Anti-GST 抗体对样本进行 WB 检测,条带5、9表示该样本中存在 GST-Pnsll,不存在 GST;条带6、10表示,该样本中存在 GST,不存在 GST-Pnsll; Pull-down: 该实验使用 GST-Pnsll 作为诱饵蛋白进行 Pull-down 实验,His-Pelo 则作为目的蛋白; 此时Anti-GST、Anti-His 代表分别以 Anti-GST 抗体...
实验组中加入的是GST融合蛋白,对照组是GST蛋白,实验组和对照组都加入His融合蛋白,目的是证明GST标签不会和His融合蛋白有相互作用。 Pull down 通过GSH Beads 沉淀GST蛋白或GST融合蛋白,如果GST融合蛋白能够拉下His融合蛋白,而GST不能拉下His融合蛋白,则说明A蛋白和B蛋白有相互作用 都拉下来或者都拉不下来则不能说明...
Pull-down: 该实验使用 GST-Pnsll 作为诱饵蛋白进行 Pull-down 实验,His-Pelo 则作为目的蛋白; 此时Anti-GST、Anti-His 代表分别以 Anti-GST 抗体和 Anti-His 抗体对 Pull-down 处理后的样本进行 WB 检测,条带4处的空白表示 GST 不会与 His-Pelo 结合,而条带3、11则表示沉淀中同时存在 GST-Pnsll 和 H...
区别:GST pull-down一般用于体外实验,非生理状态下的验证,蛋白质的结构和形式可能与天然状态下存在一定差异,一般用于体外验证两个已知蛋白的直接相互作用。co-IP实验反映的是两个蛋白在体内或细胞水平的相互作用,因为在进行co-IP检测时,样本一般源于非变性裂解细胞,活细胞状态下蛋白质之间的相互作用被保持,所以其反映...
Co-IP,GST pull down和酵母双杂交是研究蛋白互做最常用的三种方法,一般常用酵母双杂交来筛选,用Co-IP和GST pull down用来验证。研究不仅在整体蛋白层面,还包括蛋白的结构域层面,GST pulldown是用来验证蛋白X与Y是直接结合的,而Y2H和Co-IP结果则还有间接作用以及非特异性作用。
GST Pull-Down技术是一种常用的生物化学方法,主要可以用于研究蛋白质相互作用、靶蛋白筛选、药物作用机制研究、细胞内定位研究、病毒与宿主相互作用等方面的问题。 应用实例:(药物作用机制研究) 2023年李雄教授团队在期刊Journal of Experimental & Clinical Cancer Research 上发表了题为“AR antagonists develop drug res...
GST pull-down和co-immunoprecipitation(co-IP)都是目前常用的蛋白质交互作用检测方法,它们的区别在于: 1. GST pull-down通常用来检测大量的非特异性蛋白质与目标蛋白相互作用。GST是一种载体蛋白,可以通过将其连接到表达靶蛋白上,在混合 物中捕获与该靶蛋白有相互作用的其他蛋白质。之后,利用GST标记的固定矩阵,用于...
GST-pull down:GST-pull down是一种亲和纯化技术,利用谷胱甘肽S转移酶(GST)标记的蛋白质作为“鱼钩”,结合目标蛋白质的亲和结合区域,通过亲和纯化的方法将目标蛋白质及其结合蛋白质从混合物中分离出来。 CoIP:CoIP是共免疫沉淀技术,利用抗体特异性地结合目标蛋白质,然后通过免疫沉淀的方法将目标蛋白质及其结合蛋白质从...
Pull Down方法是一种利用亲和剂（如GST标签、蛋白A/G磁珠等）将目标蛋白及其相互作用的蛋白一起富集的技术。其基本步骤包括：1）将目标蛋白与亲和剂结合，形成复合物；2）将复合物与亲和剂固定在固相载体上；3）将混合物与固相载体接触，使目标蛋白及其相互作用的蛋白与亲和剂结合；4）洗涤去除非特异性结合的蛋白；...