Pull-down: 该实验使用 GST-Pnsll 作为诱饵蛋白进行 Pull-down 实验,His-Pelo 则作为目的蛋白; 此时Anti-GST、Anti-His 代表分别以 Anti-GST 抗体和 Anti-His 抗体对 Pull-down 处理后的样本进行 WB 检测,条带4处的空白表示 GST 不会与 His-Pelo 结合,而条带3、11则表示沉淀中同时存在 GST-Pnsll 和 H...
实验组中加入的是GST融合蛋白,对照组是GST蛋白,实验组和对照组都加入His融合蛋白,目的是证明GST标签不会和His融合蛋白有相互作用。 Pull down 通过GSH Beads 沉淀GST蛋白或GST融合蛋白,如果GST融合蛋白能够拉下His融合蛋白,而GST不能拉下His融合蛋白,则说明A蛋白和B蛋白有相互作用 都拉下来或者都拉不下来则不能说明...
实验组中加入的是GST融合蛋白,对照组是GST蛋白,实验组和对照组都加入His融合蛋白,目的是证明GST标签不会和His融合蛋白有相互作用。 Pull down 通过GSH Beads 沉淀GST蛋白或GST融合蛋白,如果GST融合蛋白能够拉下His融合蛋白,而GST不能拉下His融合蛋白,则说明A蛋白和B蛋白有相互作用 都拉下来或者都拉不下来则不能说明...
Pull-down: 该实验使用 GST-Pnsll 作为诱饵蛋白进行 Pull-down 实验,His-Pelo 则作为目的蛋白; 此时Anti-GST、Anti-His 代表分别以 Anti-GST 抗体和 Anti-His 抗体对 Pull-down 处理后的样本进行 WB 检测,条带4处的空白表示 GST 不会与 His-Pelo 结合,而条带3、11则表示沉淀中同时存在 GST-Pnsll 和 H...
Co-IP,GST pull down和酵母双杂交是研究蛋白互做最常用的三种方法,一般常用酵母双杂交来筛选,用Co-IP和GST pull down用来验证。研究不仅在整体蛋白层面,还包括蛋白的结构域层面,GST pulldown是用来验证蛋白X与Y是直接结合的,而Y2H和Co-IP结果则还有间接作用以及非特异性作用。
从两者的实验原理我们不难发现,gst pull-down和coip实验都是通过一种多组分的固相复合物将诱饵蛋白固定,随后富集靶标蛋白,从而确定靶标蛋白和诱饵蛋白互相作用的事实,整体思路是很类似的;不过由于固定诱饵蛋白的方法不同,二者在适用范围上,以及实验难度...
免疫共沉淀(Co-IP)、GST Pull-Down与蛋白邻近标记技术各有其独特的优势和应用场景,但是也有其局限性。在某些方面这三种实验方法也是相互补充的,在进行研究时首先我们可以通过蛋白邻近标记技术来筛选互作蛋白,然后通过GST pull-down技术验证在体外蛋白质-蛋白质是否互作,最后利用免疫共沉淀(Co-IP)技术验证在体内蛋白质...
区别:GST pull-down一般用于体外实验,非生理状态下的验证,蛋白质的结构和形式可能与天然状态下存在一定差异,一般用于体外验证两个已知蛋白的直接相互作用。co-IP实验反映的是两个蛋白在体内或细胞水平的相互作用,因为在进行co-IP检测时,样本一般源于非变性裂解细胞,活细胞状态下蛋白质之间的相互作用被保持,所以其反映...
GST-pull down和CoIP是常用的蛋白质相互作用研究技术,它们在生物科技和药物研发领域中起着重要的作用。GST-pull down和CoIP的主要区别如下: 1.原理: GST-pull down:GST-pull down是一种亲和纯化技术,利用谷胱甘肽S转移酶(GST)标记的蛋白质作为“鱼钩”,结合目标蛋白质的亲和结合区域,通过亲和纯化的方法将目标蛋白...
GST pull-down和co-immunoprecipitation(co-IP)都是目前常用的蛋白质交互作用检测方法,它们的区别在于: 1. GST pull-down通常用来检测大量的非特异性蛋白质与目标蛋白相互作用。GST是一种载体蛋白,可以通过将其连接到表达靶蛋白上,在混合 物中捕获与该靶蛋白有相互作用的其他蛋白质。之后,利用GST标记的固定矩阵,用于...