Co-IP和GST pull-down都是用于检测蛋白相互作用的实验,两者有很多相似之处,但在原理及实验操作上也存在一定的区别。 本文就Co-IP和GST pull-down在原理及操作流程上的区别做详细的讲解,同时结合文献案例给大家分享CoIP和GST pull-down实验结果的分析方法。 一、Co-IP/GST pull-down原理 Co-IP 基本原理 用某一...
2. GST pull-down可检测到利用啮齿动物细胞从组织中获得的细胞匀浆等,而CO-IP主要是进行蛋白免疫染色实验,并且其灵敏度也更高。 3. CO-IP通常只能采用单个抗体,用于检测特定的 相互作用 ,而GST pull-down使用基础载体蛋白质的普遍性使其不局限于特定的相互作用关 系 4. GST pull-down技术虽然是一种较为简单,...
CoIP:CoIP的优点是不需要对目标蛋白质进行特殊标记,可以保持其天然状态。缺点是需要制备特异性抗体,并且可能存在非特异性结合的问题。 综上所述,GST-pull down和CoIP是两种常用的蛋白质相互作用研究技术,它们在原理、目标蛋白质的选择、实验步骤、结果分析和优缺点等方面存在一些区别。研究人员可以根据具体的研究目的和...
从两者的实验原理我们不难发现,GST pull-down和CoIP实验都是通过一种多组分的固相复合物将诱饵蛋白固定,随后富集靶标蛋白,从而确定靶标蛋白和诱饵蛋白互相作用的事实,整体思路是很类似的;不过由于固定诱饵蛋白的方法不同,二者在适用范围上,以及实验难度上均有差异。 GST pull-down一般用于体外实验,因为诱饵蛋白是需要...
GST pull down: GST pull-down实验是一个行之有效的验证酵母双杂交系统的体外试验技术, 近年来越来越受到广大学者的青睐。 原理:将靶蛋白和GST组成的融合蛋白固定在谷胱甘肽(GSH)亲和树脂上,作为与目的蛋白亲和支撑物,充当一种“诱饵蛋白”,目的蛋白溶液过柱,可从中捕获与之相互作用的“捕获蛋白”(目的蛋白),洗脱...
GST pull Down 与CO-IP的区别GST pull down和CO-IP(Co-immunoprecipitation)都是蛋白质相互作用的实验方法,但是它们的原理和应用场景略有不同。GST pull down是一种用于检测蛋白质相互作用的体外技术。该方法利用GST(谷胱甘肽S-转移酶)标记的蛋白质结合纯化的靶蛋白,然后用洗涤剂去除未结合的蛋白质。通过SDS-PAGE(...
从两者的实验原理我们不难发现,GST pull-down和CoIP实验都是通过一种多组分的固相复合物将诱饵蛋白固定,随后富集靶标蛋白,从而确定靶标蛋白和诱饵蛋白互相作用的事实,整体思路是很类似的;不过由于固定诱饵蛋白的方法不同,二者在适用范围上,以及实验难度上均有差异。
1)、诱饵蛋白找不到CoIP级的抗体,而GST Pull-down不需要CoIP级的免疫捕获抗体,正好克服了这个难题。 2)、目的蛋白所在的研究对象(比如真菌等)无法采用普通的标签质粒转染、转化的方法进行外源标签融合蛋白的过表达,也找不到内源蛋白的抗体,这时便无法实施CoIP实验,因此GST Pull-down就是这类情况下研究蛋白互作的唯...
1. 区别于CoIP,GST pull down技术可以明确两个蛋白质之间是否直接作用。 2. 可用于筛选与目的蛋白质直接结合的蛋白质族群。 3. 可联合酵母双杂交系统综合评估蛋白质之间的相互作用关系,是一个有效的验证酵母双杂交系统的体外试验技术。 不足: 1. 体外表达的重组蛋白,无法完全模拟特定生理状态下的蛋白质活性及结合...