二、实验步骤 1. 细胞培养准备:将细胞培养基加热至37°C,然后用该培养基将细胞进行冲洗,以保证培养皿中的细胞质量和活性。 2. 细胞处理:将细胞样本移至离心管中,并进行离心,去除培养基。然后加入适量的新鲜培养基。 3. 荧光探针处理:将dcfh-da荧光探针溶解在适量的溶剂中,得到一定浓度的荧光探针溶液。然后将此...
DCFH-DA(二氯二氢荧光素-乙酰乙酸酯)本身无荧光,可自由透过活细胞膜进入细胞内,并被细胞内的酯酶水解,形成DCFH,DCFH无荧光且不能通透细胞膜,从而被细胞内的活性氧氧化生成有荧光的DCF。根据活细胞中荧光的产生,可以判断细胞活性氧的含量和变化。 实验步骤 细胞准备: · 根据不同的细胞类型选择合适的细胞培养板进行...
需根据具体应用来调整合适的工作浓度。 3.吸走培养液,加入步骤2)配制的染色工作液到细胞内,室温或30℃孵育5~60min。 4.吸走染色工作液,用预热的生理缓冲液或细胞培养液清洗一遍。重新加入预热的生理缓冲液或细胞培养液,在适宜温度内孵育。对于二乙酸酯衍生物,需要短暂复原时间让细胞内酯酶将其水解,从而让染料对氧...
DCFH-DA 使用步骤的改进：1. 在使用 DCFH-DA 之前，请确保粉末完全落入样品管底部。为此，可适当离心 DCFH-DA 粉末。2. 将 DCFH-DA 溶解于适量的无水 DMSO 中，并通过有机滤器过滤以去除杂质。配制成 1～10 mM 的储存液，分装并存放在冰箱中，避免反复冻融，以保持试剂的活性。3. 实验开始前...
一、荧光法检测活性氧实验原理 活性氧检测试剂盒(ReactiveOxygen Species Assay Kit,也称ROS Assay Kit)是一种利用荧光探针DCFH-DA进行活性氧检测的 试剂盒。DCFH-DA本身没有荧光,可以自由穿过细胞膜,进入细胞内后,可以被细胞内的酯酶水解生成DCFH。而DCFH不能通透细胞膜,从而使探针很容易被装载到细胞内。细胞内的活...
DCFH-DA 的使用步骤：DCFH-DA 使用仅提供指导和参考，具体实验方案应针对您的特定应用进行修改：1. BCECF开封前，适当的做离心，以保证粉末落入样品管低,确保染料足量；2. 加入适量无水DMSO（DMSO检验用有机滤器进行过滤使用） 或者其他有机溶剂配制成 1～10mM储存液进行使用，剩余的制备液分装存储，...
在应用过程中,需要充分了解其原理和局限性,选择适合的实验仪器和实验条件,以获得更加准确的实验结果。 DCfhda DCfhda荧光探针的使用方法较为简单,一般情况下,可以按照以下步骤进行操作: 1.将DCfhda荧光探针溶于适当的有机溶剂中,如DMSO、甲醇等; 2.将细胞准备妥当后,将DCfhda荧光探针加入培养基中并搅匀; 3.将...
3. （可选步骤）如果需要，使用ROS 不敏感的荧光素染料 DCFDA 作为阳性对照，与H 2DCFDA 探针一起使用。染色方法与H 2DCFDA 相同。 注意事项 1. 在实验开始前，产品应以高浓度贮存，并保持密封。2. 实验中，在预热的PBS 、HBSS 或HEPES 等其他简单的生理缓冲液中加入该产品，推荐工作浓度为1-10 μM 。
1、推荐 CDFH-DA 1:1000 稀释即初始工作浓度为 10μM。针对不同的细胞和刺激, CDFH-DA 有效工作浓度可在 100nM-20μM 宽范围内变动,因此需要进行预实验 确定合适浓度。 2、CDFH-DA 可稀释于培养基或缓冲液中。但如果培养基颜色或血清干扰荧光测定, 需将 CDFH-DA 稀释于无酚红无血清培养基或适宜的缓冲...
我现在的操作方法：20ml平行样2个，分别加入dcfh-da-dmso 5μL，涡旋混合器3min打散菌丝 → 24℃摇床...