DCFH-DA检测法实际上是一种间接测定活性氧的方法。原理基于DCFH-DA能够通过酯酶水解成DCFH,而DCFH可以直接或通过活性氧来氧化生成DCF。因此,DCF的荧光强度与细胞内的活性氧水平成正相关。DCFH-DA检测法常用于检测细胞或组织中的过氧化氢(H2O2)、羟自由基(•OH)、超氧阴离子(O2•-)等活性氧物种。 DCFH-DA检测...
佳的复原时间范围很广,由于某些细胞类型通常显示极其低水平的酯酶活性。 5.将细胞暴露于实验刺激物之前,先测定加载细胞的背景荧光强度。 6.根据以下情况评估阴性对照(Negative control), ①绿色发射光谱内检查未染色细胞的自荧光情况。 ②对于流式分析,查明染料加载和处理后细胞的前向角散射和侧向角散射是不变。细胞...
2、探针装载完毕并洗净残余探针后,可以进行激发波长的扫描和发射波长的扫描,以确认探针的装载情况是否良好。 3、尽量缩短探针装载后到测定所用的时间(刺激时间除外),以减少各种可能的误差。 4、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。 二、使用说明 1、装载探针 对于刺激时间较短(通常为2小时以内)的...
DCFH-DA激酶测定 ROS测量 为了检测细胞内ROS水平,使用ROS敏感性探针H2DCFDA。 将贴壁细胞(ESC,difESC,eMSC,HeLa,U118)与PBS中的5μM染色溶液在37℃下在黑暗中孵育30分钟,然后用0.05%胰蛋白酶-EDTA溶液收获,悬浮在新鲜培养基中,并且 用流式细胞仪立即分析。 将对照和PHA活化的淋巴细胞重悬浮于PBS中,与5μMH2...
在活性氧存在的条件下,DCFH被氧化生成荧光物质DCF,绿色荧光强度与细胞内活性氧水平成正比,检测DCF 的荧光就可以知道细胞内活性氧的水平。在激发波长502 nm,发射波长530 nm 附近,使用荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、荧光分光光度计、荧光酶标仪、流式细胞仪等检测DCF荧光,从而测定细胞内活性氧水平。本试剂盒可以用于...
通过测定细胞内ROS水平,可以辅助临床医生对疾病进行早期诊断和病情监测,为个体化治疗提供依据。根据细胞内ROS的分布和水平,还可设计针对氧化应激的靶向治疗策略。 五、 dc fhd-da荧光探针实验方法的发展与前景 dcfh-da荧光探针实验方法作为一种常用的氧化应激实验技术,已经在许多研究领域得到了广泛应用。随着科研技术的...
5.将细胞暴露于实验刺激物之前,先测定加载细胞的背景荧光强度。 6.根据以下情况评估阴性对照(Negative control), ①绿色发射光谱内检查未染色细胞的自荧光情况。 ②对于流式分析,查明染料加载和处理后细胞的前向角散射和侧向角散射是不变。细胞尺寸的变化可能与起泡或萎缩有关,由于处理或有毒反应引起的。
将细胞暴露于实验刺激物之前,先测定加载细胞的背景荧光强度。 根据以下情况评估阴性对照(Negative control), 绿色发射光谱内检查未染色细胞的自荧光情况。 对于流式分析,查明染料加载和处理后细胞的前向角散射和侧向角散射是不变。细胞尺寸的变化可能与起泡或萎缩有关,由于处理或有毒反应引起的。 对包含和不包含刺激物...
在激发波长502 nm,发射波长530 nm附近,使用荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、荧光分光光度计、荧光酶标仪、流式细胞仪等检测DCF 荧光,从而测定细胞内活性氧水平。 活性氧(Reactive oxygen species, ROS) 包括过氧化氢(H2O2,Hydrogen peroxide)、羟基自由基(•OH,Hydroxyl radical)、单线态氧(1O2,Singlet oxygen)、一...
DCFH-DA激酶测定 ROS测量 为了检测细胞内ROS水平,使用ROS敏感性探针H2DCFDA。 将贴壁细胞(ESC,difESC,eMSC,HeLa,U118)与PBS中的5μM染色溶液在37℃下在黑暗中孵育30分钟,然后用0.05%胰蛋白酶-EDTA溶液收获,悬浮在新鲜培养基中,并且 用流式细胞仪立即分析。 将对照和PHA活化的淋巴细胞重悬浮于PBS中,与5μMH2...