二、实验步骤 1. 细胞培养准备:将细胞培养基加热至37°C,然后用该培养基将细胞进行冲洗,以保证培养皿中的细胞质量和活性。 2. 细胞处理:将细胞样本移至离心管中,并进行离心,去除培养基。然后加入适量的新鲜培养基。 3. 荧光探针处理:将dcfh-da荧光探针溶解在适量的溶剂中,得到一定浓度的荧光探针溶液。然后将此...
2.于正式实验前,用生理盐缓冲液(比如:PBS,HBSS,HEPES)稀释到工作浓度1-10μM。需根据具体应用来调整合适的工作浓度。 3.吸走培养液,加入步骤2)配制的染色工作液到细胞内,室温或30℃孵育5~60min。 4.吸走染色工作液,用预热的生理缓冲液或细胞培养液清洗一遍。重新加入预热的生理缓冲液或细胞培养液,在适宜温度...
4️⃣ 孵育细胞:在步骤1中孵育30分钟。 5️⃣ 再次洗涤:丢弃工作溶液,用HBS洗涤两次。 6️⃣ 诱导ROS:在适当的时间内添加含有ROS诱导剂的培养基,并在步骤1中孵育。 7️⃣ 观察荧光:丢弃上清液,用HBS洗涤两次细胞,并添加HBSS以观察荧光信号。📊 DCFH-DA 光谱: 通过激发波长和发射波长的测量,可以...
(2)去除细胞培养液,加入适当体积稀释好的DCFH-DA; (3) 37度培养箱中孵育15-20 min,用无血清培养液洗涤细胞3次; (4)置于显微镜下观察拍照。 4、活性氧检测注意事项 (1)试剂盒保存在2-8℃,使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶,这属于正常现象,水浴加热使结晶完全溶解后再使用。 (2)实验...
DCFH-DA 的使用步骤：DCFH-DA 使用仅提供指导和参考，具体实验方案应针对您的特定应用进行修改：1. BCECF开封前，适当的做离心，以保证粉末落入样品管低,确保染料足量；2. 加入适量无水DMSO（DMSO检验用有机滤器进行过滤使用） 或者其他有机溶剂配制成 1～10mM储存液进行使用，剩余的制备液分装存储，...
在应用过程中,需要充分了解其原理和局限性,选择适合的实验仪器和实验条件,以获得更加准确的实验结果。 DCfhda DCfhda荧光探针的使用方法较为简单,一般情况下,可以按照以下步骤进行操作: 1.将DCfhda荧光探针溶于适当的有机溶剂中,如DMSO、甲醇等; 2.将细胞准备妥当后,将DCfhda荧光探针加入培养基中并搅匀; 3.将...
1、0.1ml 10mM DCFH-DA in DMSO,-20℃保存。 2、1ml活性氧供氢体,4-8℃保存。 三、组织样本操作步骤:(可用激光共聚焦显微镜观察,也可用于流式细胞仪、荧光酶标仪、荧光分光度计测定) 1、单细胞悬液制备: 活性氧(ROS)化学荧光法试剂盒说明书
DCFH-DA 的使用步骤: DCFH-DA使用仅提供指导和参考,具体实验方案应针对您的特定应用进行修改: 1. BCECF开封前,适当的做离心,以保证粉末落入样品管低,确保染料足量; 2. 加入适量无水DMSO(DMSO检验用有机滤器进行过滤使用) 或者其他有机溶剂配制成 1～10mM储存液进行使用,剩余的制备液分装存储,避免重复冻融影响...
1、推荐 CDFH-DA 1:1000 稀释即初始工作浓度为 10μM。针对不同的细胞和刺激, CDFH-DA 有效工作浓度可在 100nM-20μM 宽范围内变动,因此需要进行预实验 确定合适浓度。 2、CDFH-DA 可稀释于培养基或缓冲液中。但如果培养基颜色或血清干扰荧光测定, 需将 CDFH-DA 稀释于无酚红无血清培养基或适宜的缓冲...