在随后几年,陆续有不少CUT&Tag的研究文章发表。此外,单细胞CUT&Tag和空间CUT&Tag技术也被陆续发表出来[1,2]。 ▶ 技术原理 CUT&Tag是研究蛋白和DNA互作新兴的实验方法,该方法是通过蛋白特异性抗体引导Protein A-Tn5酶在目标蛋白结合的DNA位置进行切割,并且在序列两端加上测序接头,经过PCR扩增后形成可用于高通量...
CUT&Tag技术凭借其高灵敏度、低背景噪音和低细胞量需求，已成为揭示基~因调控机制、解析染色质状态和推动精准yi学研究的重要工具，并广泛应用于表观遗传学研究、转录因子结合位点分析、疾bing机制解析、yao物筛选与作用机制探索以及单细胞水平的基~因调控研究等多领域。依托先进的Protein A/G-Tn5融合蛋白体系和高通量...
使用CUT&Tag,可以大大降低细胞投入量以及操作时间,一天内就可以得到高质量的高通量测序文库。 CUT&Tag是蛋白-DNA互作的一大革新技术,它不需要使用甲醛交联以及免疫共沉淀,而是通过针对靶蛋白(如转录因子、染色质重塑蛋白)的抗体和Protein A的介导,使得与Protein A融合的Tn5酶(Tagmentase)在切割DNA片段的同时在序列两端...
通过对这篇文章的部分解读可知：1）CUT&Tag不仅可以用于研究组蛋白和转录因子这种蛋白，也可以用于研究核酸序列，前提是有合适的抗体；2）CUT&Tag技术与ChIP-seq相比具有多方面的优势。当然，我们此次解读的这篇文章研究内容非常丰富，信息量大，篇幅所限，不做一一介绍，感兴趣的可以查看原文。上海欧易生物完成了多例...
一、CUT&Tag技术发展历程 ChIP-Seq (Chromatin Immunoprecipitation Sequencing) 因能真实、完整地反映靶蛋白与DNA序列的结合情况,因而成为一直以来研究DNA-蛋白相互作用的经典方法。但ChIP-Seq继承了ChIP的难点与局限性:需要大量细胞投入(10...
CUT&Tag(Cleavage Under Targets and Tagment)作为一种新兴的DNA蛋白互作研究技术,凭借其信噪比高,可重复性好,实验周期更快等优势,在植物以及动物细胞中的成功应用与科研文章的发表[1-2],受到广大科研工作者的信赖。 CUT&Tag是蛋白质与DNA互作研究的革新技术,其核心技术为pA/G-Tn5 Transposase,将Protein A/G与...
CUT&Tag在植物上的应用 2019年Kaya-Okur等人首先在哺乳动物中使用CUT&Tag技术提供了高分辨率测序来分析不同的染色质组分,通过在低样本量和单细胞水平分析组蛋白修饰、RNA聚合酶II和转录因子的表达证明了CUT&Tag技术的实用性 (Kaya-Okur et al., 2019)。这是首次运用CUT&Tag技术进行动物细胞组蛋白修饰及转录因子结...
(1)CUT&Tag单细胞实验 实验证明,CUT&Tag细胞可以用于单细胞测序,而这是百万级细胞起始量ChIP-Seq技术所不能实现的。多篇文章表明CUT&Tag技术在单细胞测序方面有很好的应用。 图6.CUT&Tag单细胞测序应用 (2)CUT&Tag技术在标签蛋白上的应用 我们知道,许多靶蛋白是没...
【注】A：在CUT&Tag实验开始前，我们需要确定实验方案。随着CUT&Tag技术的发展,科学家们发现有些目标蛋白质在研究时，轻微甲醛交联效果更好。之后，更多的研究表明，使用CUT&Tag技术研究不同蛋白时，所需的实验条件也不一样。做组蛋白修饰、强结合的转录因子(如CTCF、RNA polll等)无需甲醛交联。而一些弱结合的...
2019年，Henikoff实验室发明了CUT&Tag，使用ProteinA/G-Tn5从而简化了二代测序的步骤，并且极大降低了细胞的起始数量。2.CUT&Tag1. 实验原理CUT&Tag是蛋白质与DNA互作的革新技术，无需通过甲醛交联以及免疫共沉淀，其核心技术为pA/G-Tn5 Transposase，将Protein A/G与Tn5转座酶进行融合，使得与抗体结合的同时，Tn5...