随着CRISPR(聚集的规则间隔短回文重复)技术的改进,催化dCas9与TET1(TET1CD)的催化结构域融合以羟基化特定基因座并激活位点特异性去甲基化。虽然这种CRISPR系统带来了很多便利,但它需要表达外源TET1酶,因此可能对细胞代谢产生意想不到的影...
dCas9-DNMT3a甲基化修饰系统是将dCas9通过灵活的Gly4Ser接头与DNMT3a的催化结构域(一种能够在体内甲基化CpG位点的活性DNA甲基转移酶)融合(图7),使靶向启动子上的DNA瞬时甲基化,从而抑制基因的表达(Liu et al., 2016)。 图7 dCas9-DNMT3a系统作用机制(Lo et al., 2017)。 (2)dCas9-TET1(DNA去甲基化修饰...
dCas9-DNMT3a甲基化修饰系统是将dCas9通过灵活的Gly4Ser接头与DNMT3a的催化结构域(一种能够在体内甲基化CpG位点的活性DNA甲基转移酶)融合(图7),使靶向启动子上的DNA瞬时甲基化,从而抑制基因的表达(Liu et al., 2016)。 图7 dCas9-DNMT3a系统作用机制(Lo et al., 2017)。 (2)dCas9-TET1(DNA去甲基化修饰...
dCas9-DNMT3a甲基化修饰系统是将dCas9通过灵活的Gly4Ser接头与DNMT3a的催化结构域(一种能够在体内甲基化CpG位点的活性DNA甲基转移酶)融合(图7),使靶向启动子上的DNA瞬时甲基化,从而抑制基因的表达(Liu et al., 2016)。 图7 dCas9-DNMT3a系统作用机制(Lo et al., 2017)。 (2)dCas9-TET1(DNA去甲基化修饰...
CRISPR-dCas9系统简介 CRISPR-dCas9系统简介 dCas9蛋⽩是Cas9蛋⽩的突变体，即Cas9内切酶的RuvC1和 HNH两个核酸酶活性区域同时发⽣突变。因此，dCas9蛋⽩的内切酶活性全部消失，只保留由gRNA引导进⼊基因组的能⼒。CRISPR-dCas9系统提供了⼀个研究定点转录调控的平台。在这个平台中，dCas9主要是与其他...
dCas9-Tet1-CD系统地靶向特异性将帮助科学家轻易地探索特定基因启动子靶点甲基化对下游基因的影响。最近,dCas9-Tet1-CD系统结合常规sgRNA也被用于靶向BRCA1启动子的表观遗传修饰,BRCA1是一种肿瘤抑制基因,其过度甲基化沉默与非家族性乳腺癌和卵巢癌相关[15]。这样的系统也可以用来恢复其他肿瘤抑制基因的功能活性。
例如,通过突变Cas9蛋白产生dCas9,只保留其作为DNA结合蛋白的功能,可以与转录激活蛋白(例如VP64)结合以激活基因表达,可以与转录抑制因子(例如KRAB)结合以抑制基因表达,还可以与表观基因组修饰因子(例如DNA甲基化酶DNMT3A、去甲基化酶TET1)结合...
例如,通过突变Cas9蛋白产生dCas9,只保留其作为DNA结合蛋白的功能,可以与转录激活蛋白(例如VP64)结合以激活基因表达,可以与转录抑制因子(例如KRAB)结合以抑制基因表达,还可以与表观基因组修饰因子(例如DNA甲基化酶DNMT3A、去甲基化酶TET1)结合,进行表观遗传调控。碱基编辑和先导编辑通过突变Cas9的催化核酸酶结构域之一,...
Tet1脱甲基酶 Ronggui Hu的实验室构建出pdCas9-Tet1-CD,能够对哺乳动物细胞进行靶向胞嘧啶脱甲基化。这个质粒可与pcDNA3.1-MS2-Tet1-CD一起使用,来减少甲基化,并激活转录。Rudolf Jaenisch的实验室则提供这种修饰的慢病毒版本Fuw-dCas9-Tet1CD。 抑制
We employed the dCas9-SunTag and single-chain variable fragment (scFv)-TET1 catalytic domain (TET1CD) system to induce targeted DNA methylation of thepromoter bothand. We succeeded in targeted DNA demethylation of thepromoter both in Hepa1-6 cells and PPARα-deficient mice, with increased gene...