为实现目标RNA上的m6A修饰,研究人员选用来自Ruminococcus flavefaciens(一种瘤胃菌)的特异性、高效率CRISPR/Cas13(Rx)系统作为锚定蛋白,依据棉花基因组特征对Cas13(Rx)蛋白进行密码子优化,并通过在保守的RNA切割HEPN域中特定位点突变,优化出催化失活的dCas13(Rx)。 基于先前研究,已知 GhALKBH9 和 GhALKBH10 可降...
研究团队成功开发了一种高精准Cas13d变体（hpCas13d），该变体通过三个氨基酸替代显著降低了附带的RNA酶活性，并能特异性地解决导致HCM的多种人类MYH7病理序列变异。体外实验验证了hpCas13d的高精准度和低附带切割活性，为后续的体内实验打下了坚实的基础。图1：高精度Cas13d的结构定向进化（A. 双荧光选择系统示意...
Cas13是一种靶向RNA的CRISPR/Cas效应器,通过特异性结合和切割RNA显示出其特有的抗病毒活性。其中Cas13d是VI-D亚型效应器,相比其他VI型变体,在抑制RNA病毒方面表现出更高的效率,尤其适用于使用AAV载体进行传递[2]。然而,Cas13d系统干扰哺乳动物体内RNA病毒的活性尚不清楚,因此,利用Cas13d结合AAV体内递送系统开发新...
通过使用腺病毒相关病毒血清型9(AAV9)将hpCas13d特异性地传递到心肌细胞中,研究团队在体内模型中评估了hpCas13d的治疗潜力。 图2:体外分裂和鉴别窗口的探索(A、B:Myh6-R872H[A]和Myh6-wt[B] 在不同浓度的Cas13d变体作用下的体外...
为实现目标RNA上的m6A修饰,研究人员选用来自Ruminococcus flavefaciens(一种瘤胃菌)的特异性、高效率CRISPR/Cas13(Rx)系统作为锚定蛋白,依据棉花基因组特征对Cas13(Rx)蛋白进行密码子优化,并通过在保守的RNA切割HEPN域中特定位点突变,优化出催化失活的dCas13(Rx)。
研究发现,CRISPR-Cas13d可以被优化以特异性地靶向C9orf72-ALS病人细胞中的GGGGCC重复RNA,并显著减少源自GGGGCC重复RNA的多聚二肽重复蛋白的翻译。 在这项研究中,研究人员首先构建了绿色荧光蛋白报告系统并比较了Cas13b和Cas13d靶向GGGGCC...
1、本发明利用crispr/cas13d和raa技术开发了一种用于检测猪繁殖与呼吸综合征病毒1型(prrsv-1)的易于操作、高灵敏度、结果直观的检测试剂盒,实现了prrsv-1的高效、可视化检测,为现场快速诊断和疾病防控提供了一种创新的技术手段。 2、本发明提供了一种基于crispr-cas13d体系检测prrsv-1的crrna,所述crrna分子的序列...
1、分析题图:CRISPR/Cas13d技术是一项以向导RNA(gRNA)引导Cas13d蛋白定向作用于靶向RNA的新兴技术,该技术可将病毒RNA基因组切割形成RNA片段。 2、RNA的基本单位是核糖核苷酸,DNA的基本单位是脱氧核苷酸。 【详解】 A、由图可知,gRNA与靶向RNA中特定序列能通过碱基互补配对形成RNA-RNA杂合双链,然后将Cas13d蛋白引导...
CRISPR/Cas13d系统的工作原理:CRISPR/Cas13d系统是由Cas13d蛋白和sgRNA组成的复合物,其中Cas13d蛋白是一种能够切割单链RNA(ssRNA)的核酸酶,而sgRNA是一种能够与Cas13d蛋白结合并指导其识别目标RNA的短片段RNA。Cas13d蛋白由四个功能域组成,分别是N端结合域(NBD)、核酸识别域(NRD)、催化域1(CTD1)和催化域2...
CRISPR/Cas13d技术是一项以向导RNA(gRNA)引导Cas13d蛋白定向作用于靶向RNA的新兴技术。研究人员设计了若干个gRNA,分别靶向新冠病毒RNA基因组的不同肽编码区,但不影响人体细胞的RNA,作用机理如图所示。下列相关叙述正确的是( ) A. Cas13d蛋白能切割含有gRNA的核糖核苷酸链 B. Cas13d蛋白与限制酶作用的底物和化学键...