研究发现,CRISPR-Cas13d可以被优化以特异性地靶向C9orf72-ALS病人细胞中的GGGGCC重复RNA,并显著减少源自GGGGCC重复RNA的多聚二肽重复蛋白的翻译。 在这项研究中,研究人员首先构建了绿色荧光蛋白报告系统并比较了Cas13b和Cas13d靶向GGGG...
该研究通过筛选和优化CRISPR-dCas13系统,在斑马鱼胚胎中实现内源mRNA的时空追踪,并揭示等位基因转录和mRNP运动的特征,为在多细胞生物体内可视化内源RNA提供强大工具。 为了实现内源mRNA的可视化,研究团队在体外纯化一系列融合荧光蛋白EGFP的dCas13(dCas...
CRISPR/Cas13d系统的工作原理:CRISPR/Cas13d系统是由Cas13d蛋白和sgRNA组成的复合物,其中Cas13d蛋白是一种能够切割单链RNA(ssRNA)的核酸酶,而sgRNA是一种能够与Cas13d蛋白结合并指导其识别目标RNA的短片段RNA。Cas13d蛋白由四个功能域组成,分别是N端结合域(NBD)、核酸识别域(NRD)、催化域1(CTD1)和催化域2...
CRISPR/Cas13d系统作用机理示意图 A. gRNA分子中,相邻碱基之间有1个核糖和1个磷酸基团 B. gRNA与病毒基因间的碱基配对方式有A—T、U—A、G—C
《Nature Neuroscience》研究表明RNA靶向的CRISPR - Cas13d系统可减轻亨廷顿模型中疾病相关表型。该研究开发Cas13d - CAGEX系统,在多模型中证实其效果,包括降低患者细胞中的mHTT、特异性分子生物标志物等,在小鼠体内也有治疗效果且安全。快来深入了解这一有望治疗亨廷顿
1月19日,国际学术期刊Genome Biology发表了中国科学院分子细胞科学卓越创新中心(生物化学与细胞生物学研究所)陈玲玲研究组的最新研究成果“CRISPR-dCas13-tracing reveals transcriptional memory and limited mRNA export in developing zebrafish embryos”。通过筛选和优化CRISPR-dCas13系统,在斑马鱼胚胎中实现内源mRNA的时...
所述应用包括:(1)根据待敲降rna病毒,选定目标核酸序列,利用上述方法筛选出高效sgrna;(2)将高效sgrna序列构建到基于crispr-cas13d系统的sgrna表达载体中,所得重组载体与含有cas13d蛋白的表达载体共同导入到感染了所述待敲降rna病毒的真核宿主细胞中。 在本发明的一个具体实施方式中,所述rna病毒为prrsv,所述目标核...
该团队筛选、构建并优化了可特异敲低环形RNA的高效CRISPR-RfxCas13d/BSJ-gRNA系统,在理论上可以针对任意环形RNA个体开展功能筛选,为研究相关环形RNA的功能提供了新的研究手段。 相较于传统的RNA干扰方法(包括shRNA和siRNA),创新型的CRISPR-RfxCas13d/BSJ-gRNA系统能够高效地敲低环形RNA表达且不影响其亲本线形mRNA表...
该研究通过筛选和优化CRISPR-dCas13系统,在斑马鱼胚胎中实现内源mRNA的时空追踪,并揭示等位基因转录和mRNP运动的特征,为在多细胞生物体内可视化内源RNA提供强大工具。 为了实现内源mRNA的可视化,研究团队在体外纯化一系列融合荧光蛋白EGFP的dCas13 (dCas13-EGFP) 并合成相应的gRNA,通过靶标外源表达的24×GCN4 RNA,...
1.基于CRISPR-Cas13d系统的sgRNA高效作用靶点的筛选方法,其特征在于,包括以下步骤: 1)合成目标核酸序列,将目标核酸序列构建到含有报告基团的载体中,且目标核酸序列与报告基团位于同一表达盒内,得到报告载体; 2)根据目标核酸序列,设计并合成一系列基于CRISPR-Cas13d系统的sgRNA序列,并将这些sgRNA序列分别构建到基于CRISPR...