该研究通过筛选和优化CRISPR-dCas13系统,在斑马鱼胚胎中实现内源mRNA的时空追踪,并揭示等位基因转录和mRNP运动的特征,为在多细胞生物体内可视化内源RNA提供强大工具。 为了实现内源mRNA的可视化,研究团队在体外纯化一系列融合荧光蛋白EGFP的dCas13(dCas...
通过使用腺病毒相关病毒血清型9(AAV9)将hpCas13d特异性地传递到心肌细胞中,研究团队在体内模型中评估了hpCas13d的治疗潜力。 图2:体外分裂和鉴别窗口的探索(A、B:Myh6-R872H[A]和Myh6-wt[B] 在不同浓度的Cas13d变体作用下的体外...
该研究构建了基于 CRISPR/dCas13 (Rx) 的可编程 m6A 编辑工具,用于棉花中相关转录本的编辑,以GhECA1、GhDi19等转录本为对象展开实验,最终得出 TME 和TDE 编辑器能有效改变特定位点 m6A 水平、调节转录水平且遗传稳定,还影响植物耐旱等性状,编辑器特异性高、脱靶效应小,为作物改良等研究提供新思路。在本次研究中,...
Fusion of diverse effector domains to dCas proteins empowers the CRISPR/dCas system as a multifunctional platform for gene expression regulation, epigenetic regulation and sequence-specific imaging. In this short review, we summarize the recent advances of CRISPR/dCas-mediated transcriptional activation...
为实现目标RNA上的m6A修饰,研究人员选用来自Ruminococcus flavefaciens(一种瘤胃菌)的特异性、高效率CRISPR/Cas13(Rx)系统作为锚定蛋白,依据棉花基因组特征对Cas13(Rx)蛋白进行密码子优化,并通过在保守的RNA切割HEPN域中特定位点突变,优化出催化失活的dCas13(Rx)。
CRISPR/Cas13d系统的工作原理:CRISPR/Cas13d系统是由Cas13d蛋白和sgRNA组成的复合物,其中Cas13d蛋白是一种能够切割单链RNA(ssRNA)的核酸酶,而sgRNA是一种能够与Cas13d蛋白结合并指导其识别目标RNA的短片段RNA。Cas13d蛋白由四个功能域组成,分别是N端结合域(NBD)、核酸识别域(NRD)、催化域1(CTD1)和催化域2...
1、本发明提供一种基于crispr/dcas融合蛋白与tsa信号放大的核酸原位检测系统及其应用,以及三种基于crispr/dcas系统的融合蛋白(dcas9-hrp、dcas9-avidin、biotin化的dcas9-avi tag),用于对病理切片上靶标基因的原位检测与精准病理诊断。 2、本发明的技术方案如下: ...
1月19日,国际学术期刊Genome Biology发表了中国科学院分子细胞科学卓越创新中心(生物化学与细胞生物学研究所)陈玲玲研究组的最新研究成果“CRISPR-dCas13-tracing reveals transcriptional memory and limited mRNA export in developing zebrafish embryos”。通过筛选和优化CRISPR-dCas13系统,在斑马鱼胚胎中实现内源mRNA的时...
1、本发明提供了一种基于crispr-dcas13d-eif4g的蛋白翻译激活系统及其应用,该系统在hk-2细胞的细胞质中可以稳定工作并增加目标基因gpx4的翻译水平,使得在蛋白翻译激活方面有了新的进展。 2、真核翻译起始因子4g(eif4g)是一种重要的模块化融合蛋白,通过结合rnahelicase(eif4a)及cap-binding protein(eif4e)形成翻译...
为实现目标RNA上的m6A修饰,研究人员选用来自Ruminococcus flavefaciens(一种瘤胃菌)的特异性、高效率CRISPR/Cas13(Rx)系统作为锚定蛋白,依据棉花基因组特征对Cas13(Rx)蛋白进行密码子优化,并通过在保守的RNA切割HEPN域中特定位点突变,优化出催化失活的dCas13(Rx)。