CRISPR-dCas9系统的功能 表观遗传重塑 表观遗传学广义上是通过DNA 和转录因子之间的相互作用实现的细胞特异性基因表达和调控。常见的表观遗传因素包括DNA 甲基化、组蛋白修饰、染色质重塑和其他转录后修饰。常见的染色质重塑的CRISPR-dCas9系统 激活或抑制基因表达：转录因子、激活因子、启动子、增强子和抑制因子是决定基因
△ CRISPR-dCas9系统的突破 梁好均教授与他的团队通过这项研究，在CRISPR-dCas9领域实现重大突破。他们设计的多模块系统增加了基因调控的精确性和灵活性。这种系统通过巧妙地融入microRNA感应器，构建了一个能响应内源性microRNA并允许内源基因可控激活的平台，其激活效率明显超越传统技术。△ 桥RNA的设计与功能 研究团...
CRISPR - dCas9 系统是一种基于 CRISPR - Cas9 技术改造而来的基因调控工具，其原理主要涉及以下几个关键方面：CRISPR - Cas9 系统基础 CRISPR - Cas9 系统是细菌和古细菌在长期进化过程中形成的一种适应性免疫防御机制，用于抵御外来噬菌体或质粒的入侵。在这个系统中，CRISPR 序列转录产生的 crRNA（CRISPR - derive...
其中CRISPR II类系统是目前使用最为广泛的RNA指导核酸内切酶技术,该系统有两个主要的组分:引导RNA(guide RNA,gRNA)和核酸内切酶(Cas9)。Cas9的核酸酶剪切活性取决于两个结构域:RuvC和HNH,它们分别负责切割DNA链的两条链,将这两个保守的核酸内切酶结构域进行突变,其中RuvC催化结构域的第10位天冬氨酸突变为丙氨酸(D10...
质粒载体:包含dCas9或nCas9和碱基脱氨酶(如胞嘧啶脱氨酶或腺苷脱氨酶)的融合蛋白。 sgRNA表达载体:用于引导dCas9/脱氨酶复合物到目标区域。 目标细胞系:用于实验的细胞系(如HEK293T细胞)。 转染试剂:如Lipofectamine 3000(用于细胞转染)。 测序试剂:用于验证突变的引物和测序服务。 其他试剂:限制性酶、T4连接酶...
CRISPR - dCas9 系统是一种基于 CRISPR - Cas9 技术改造而来的基因调控工具,其原理主要涉及以下几个关键方面: CRISPR - Cas9 系统基础:CRISPR - Cas9 系统是细菌和古细菌在长期进化过程中形成的一种适应性免疫防御机制,用于抵御外来噬菌体或质粒的入侵。在这个系统中,CRISPR 序列转录产生的 crRNA(CRISPR - derived...
CRISPR - dCas9 系统是一种基于 CRISPR - Cas9 技术改造而来的基因调控工具,其原理主要涉及以下几个关键方面: CRISPR - Cas9 系统基础:CRISPR - Cas9 系统是细菌和古细菌在长期进化过程中形成的一种适应性免疫防御机制,用于抵御外来噬菌体或质粒的入侵。在这个系统中,CRISPR 序列转录产生的 crRNA(CRISPR - derived...
近年来,由CRISPR/Cas9衍生而来的CRISPR-dCas9系统已被用于基因成像、高通量筛选、基因调控、必需基因功能研究及表观遗传调控等多个方向。 CRISPR-dCas9系统的作用机制 单独的dCas9与靶位点的结合在空间上可以干扰转录酶的结合,起到抑制靶向基因转录的作用,这一过程称为CRISPRi(或CRISPR干扰)。这个简单的CRISPRi系统可...
Cas9d 系统的生化特性:研究人员将来自 Deltaproteobacteria 的 747 个氨基酸的 Cas9d 蛋白与 157-nt 的单导向 RNA(sgRNA)共表达,发现 Cas9d 与 CRISPR 阵列和适应机制 Cas1-Cas2 共定位,暗示它可能是一个活跃的防御系统。进一步研究表明,Cas9d 切割 DNA 靶标的活性具有剂量和时间依赖性,并且需要镁离子的参与。
dCas9蛋白是Cas9蛋白的突变体,即Cas9内切酶的RuvC1和HNH两个核酸酶活性区域同时发生突变。因此,dCas9蛋白的内切酶活性全部消失,只保留由gRNA引导进入基因组的能力。 CRISPR-dCas9系统提供了一个研究定点转录调控的平台。在这个平台中,dCas9主要是与其他效应蛋白融合(如GFP、转录因子、组蛋白修饰等),进行基因调控,基因...