CRISPR-dCas9系统简介 CRISPR-dCas9系统简介 dCas9蛋⽩是Cas9蛋⽩的突变体，即Cas9内切酶的RuvC1和 HNH两个核酸酶活性区域同时发⽣突变。因此，dCas9蛋⽩的内切酶活性全部消失，只保留由gRNA引导进⼊基因组的能⼒。CRISPR-dCas9系统提供了⼀个研究定点转录调控的平台。在这个平台中，dCas9主要是与其他...
Figure 2:The dCas9-SAMtranscriptional activation system. a) The dCas9-SAM system is made up of adCas9 fused to the transcriptional activator, VP64. The accompanying sgRNA canalso be modified to contain two RNA aptamers for binding with MS2 coat proteinsthat are also fused to one p65 and o...
(1) dCas9- 转录调控蛋白融合系统; 基于sgRNA 引导dCas9 识别并结合目的基因DNA 的原理,研究人员将不同的转录激活结构域直接与dCas9 蛋白融合,利用dCas9的DNA 结合活性,直接( 或间接) 将各类转录激活因子携带到目的基因的转录起始位点上游,通过转录激活因子直接招募转录起始复合物,实现目的基因的激活。按照转录激活...
dCas9-DNMT3a甲基化修饰系统是将dCas9通过灵活的Gly4Ser接头与DNMT3a的催化结构域(一种能够在体内甲基化CpG位点的活性DNA甲基转移酶)融合(图7),使靶向启动子上的DNA瞬时甲基化,从而抑制基因的表达(Liu et al., 2016)。 图7 dCas9-DNMT3a系统作用机制(Lo et al., 2017)。 (2)dCas9-TET1(DNA去甲基化修饰...
方案一:Crispr/dSaCas9转录激活系统-AAV 方案二:Crispr/dSaCas9转录激活系统-Lentivirus 靶向RNA的CRISPR/Cas13d系统 服务流程 客户提供 案例展示 CRISPR-Cas9基因编辑服务 一、CRISPR-Cas技术是什么? CRISPR/Cas系统是一种原核生物的免疫系统,用来抵抗外源遗传物质的入侵,比如噬菌体病毒和外源质粒。同时,它为细菌提供...
科学家们通过对cas9蛋白进行改造后,进一步拓展了其应用范围,今天,小恒就带大家一起来了解下cas9系统在转录调控中的应用。 一、dCas9调控基因转录原理 Cas9蛋白具有独立结合DNA和切割DNA的结构域,对DNA的切割主要依赖于HNH和RuvC结构域,这两个结构域相互独立,分别去切割DNA的两条链,将HNH和RuvC的切割位点突变后既不...
科学家们通过对cas9蛋白进行改造后,进一步拓展了其应用范围,今天,小恒就带大家一起来了解下cas9系统在转录调控中的应用。 一、dCas9调控基因转录原理 Cas9蛋白具有独立结合DNA和切割DNA的结构域,对DNA的切割主要依赖于HNH和RuvC结构域,这两个结构域相互独立,分别去切割DNA的两条链,将HNH和RuvC的切割位点突变后既不...
Gilbert等(Gilbert Luke A et al.,2013)构建了dCas9-p65融合蛋白,证实其能有效激活靶基因。由于dCas9-p65融合蛋白含有单一的p65激活结构域,因此它对靶基因的激活作用有限。为了提高其效果,Lin等人将高活性的VP64-P65-RTA结构域与dCas9蛋白融合,构建了dCas9-VPR激活系统(Lin, S.et al.,2015)。在果蝇细胞和...
dCas9（dead Cas9）是Cas9蛋白的突变体，即因Cas9的RuvC1和 HNH两个核酸酶活性区域同时发生突变产生，...
在“谈谈CRISPR/dCas9系统的“百变”应用(一)”中伯小远主要给大家讲解了CRISPR/dCas9的基础背景知识,以及该系统在基因的激活与抑制、表观基因组编辑(DNA甲基化修饰、组蛋白修饰)这两个方面的应用情况。除此之外,CRISPR/dCas9系统在基因组学研究中的应用还包括:单碱基编辑、靶向染色质拓扑结构、植物活细胞染色质...