首先激活特定基因的表达可以通过dCas9与转录调节因子VP64、EDLL等的融合来实现(图2)。将dCas9与典型的转录激活因子VP64融合后,当dCas9-VP64通过gRNA靶向到靶基因的启动子序列时,该复合物通常能够招募调节哺乳动物细胞转录的转录因子(Paul and Qi, 2016)。此外,dCas9-VP64系统还可用于植物中内源基因的转录激活(M...
针对非模板DNA链设计的sgRNA能有效沉默dCas9基因的表达,而针对模板DNA链设计的sgRNA不能有效沉默基因的表达。sgRNA与靶基因启动子序列的相对位置对沉默效率也有显著影响。重要的是,无论靶序列是模板链还是非模板链,对于靶向启动子序列的sgRNA基因沉默都会发生。2013年7月,Qi等人的另一项研究发现,dCas9与VP64、KRAB等...
对于CRISPRa，是基于切割活性丧失的dCas9结合多种转录激活因子，在向导RNA（gRNA）实现的，gRNA引导dCas9和转录因子结合在特定的DNA序列，从而激活基因表达。由于dCas9的DNA切割活性丧失，因此不会造成DNA双链断裂，因此具有更高的安全性。 第一代CRISPRa系统基于dCas9-VP64，第二代CRISPRa系统包括dCas9-SunTag等，第...
2013年7月,Qi等人的另一项研究发现,dCas9与VP64、KRAB等转录调控相关的效应蛋白相互作用共同调控基因表达,这是目前dCas9最常用的用途。 首次研究利用CRISPR技术治疗疾病。在CRISPR/Cas9被证明在哺乳动物细胞中发挥作用后的几个月里,科学家迅速在小鼠、果蝇和大鼠...
CRISPR-dCas9系统即是dCas9与转录激活因子(如VP64、VPR、SAM或SunTag)或转录抑制因子(如KRAB)融合后,结合sgRNA能促进或抑制目的基因的表达。 CRISPR-dCas9系统是通过激活或抑制细胞内源基因表达来提高或抑制目标基因的表达量,它不需要转入外源DNA,操作更简易。此系统可在同一个启动子上设计多个sgRNA来提高或抑制基因...
01CRISPR/dCas9基因激活系统 首先激活特定基因的表达可以通过dCas9与转录调节因子VP64、EDLL等的融合来实现(图2)。将dCas9与典型的转录激活因子VP64融合后,当dCas9-VP64通过gRNA靶向到靶基因的启动子序列时,该复合物通常能够招募调节哺乳动物细胞转录的转录因子(Paul and Qi, 2016)。此外,dCas9-VP64系统还可用于...
1、dCas9-VP64 VP64是单纯疱疹病毒16(VP16)的四聚体,可在转录水平激活基因表达。Gilbert等人(Gilbert Luke A et al.,2013)将dCas9与VP64融合蛋白,有效地激活了Gal4UAS-GFP的表达。此外,在特异靶向NTF3和VEGFA的单个或多个sgRNA的引导下,dCas9-VP64显著增加了基因的表达,表明该融合蛋白可以特异性地激活内...
CRISPRa是通过融合dCas9到反式激活结构域,例如VP64及其衍生物实现。类似地,核酸酶死亡的Cas9蛋白融合可用于激活特定基因的表达,通过直接募集转录激活因子或调节染色质状态。 3.4 RNA 编辑技术 与基因组编辑不同,RNA编辑技术利用靶向RNA的Cas13核酸酶,用于靶向转录本降解(当具有催化活性时)或用于转录本编辑(当催化失活...
相关研究表明除了转录激活因子VP64与dCas9融合能够提高转录水平以外,三种基于CRISPR-dCas9的转录激活系统(VPR, SAM和SunTag)在动物细胞中也能提高目的基因表达,并且效果更好应用更广泛。 CRISPR-dCas9系统是通过激活或抑制细胞内源基因表达来提高或抑制目标基因的表达量,它不需要转入外源DNA,操作更简易。此系统可在同一...
Gilbert等(Gilbert Luke A et al.,2013)构建了dCas9-p65融合蛋白,证实其能有效激活靶基因。由于dCas9-p65融合蛋白含有单一的p65激活结构域,因此它对靶基因的激活作用有限。为了提高其效果,Lin等人将高活性的VP64-P65-RTA结构域与dCas9蛋白融合,构建了dCas9-VPR激活系统(Lin, S.et al.,2015)。在果蝇细胞和...