2. 慢病毒载体的构建及感染宿主细胞：将sgRNA文库进行慢病毒包装，并以较低的病毒感染复数转导至Cas9表达细胞系，确保每个细胞只进入1个病毒，从而实现每个细胞只有一个基因被编辑。3. 阳性或阴性筛选：根据研究目的不同，CRISPR高通量筛选分为阳性筛选和阴性筛选。阳性筛选指施加一定的筛选压力（如药物），经文库扰动...
整个流程包括以下几个步骤: 慢病毒文库构建 📚 首先,我们需要构建一个慢病毒文库。这个文库将包含所有可能的GRNA,它们能够靶向我们感兴趣的基因。 文库病毒感染细胞 🦠 接下来,将这个文库病毒感染到细胞中。病毒感染后,细胞会表达出相应的GRNA,从而对基因进行剪切。 细胞实验筛选 🔍 在细胞实验中,我们可以通过观...
细胞选择：选择适合的细胞系进行基因编辑实验。转染方法：通过电穿孔、脂质体介导转染或病毒感染等方法将CRISPR-Cas9载体和供体DNA同时导入细胞。5. 筛选和验证 抗性筛选：如载体中包含抗性基因，可使用相应的抗生素进行初步筛选。单克隆挑选：挑选单个细胞克隆进行扩增培养。验证敲入：通过PCR、测序和Southern blot等方法验...
4.微生物工程:CRISPR-Cas9技术在微生物工程中的应用包括改造细菌或酵母用于生产生物燃料、药物和其他化学品。通过精确编辑微生物的基因组,可以提高它们的生产效率和产品质量。 七、CRISPR-Cas9基因技术研究流程 以下是一个模拟的研究方案,使用CRISPR-Cas9技术进行基因敲除: 假设研究目标 研究特定基因(例如,基因X)在癌细...
细胞转染:将构建好的表达载体转染到目标细胞中,使gRNA和Cas9蛋白进入细胞内部。🔍 五、筛选编辑细胞 药物筛选:利用特定的药物(如抗生素)筛选成功转染的细胞,去除未转染的细胞。 流式分选:利用流式细胞仪对转染后的细胞进行分选,筛选出成功编辑的细胞群体。🔬...
CRISPR-Cas9实验流程如下: 1.设计sgRNA:根据目标基因的序列,设计合适的sgRNA。sgRNA是一段引导Cas9蛋白到特定DNA序列的RNA分子。 2.合成sgRNA:可以通过化学合成或体外转录的方法合成sgRNA。 3.构建CRISPR-Cas9表达载体:将sgRNA和Cas9蛋白的编码序列构建到合适的表达载体中。 4.转染细胞:将构建好的CRISPR-Cas9表达载体转...
图2:全基因组CRISPR/Cas9敲除文库筛流程及茶叶素诱导自噬抑制示意图。 Guan-Nan Li et al., Signal Transduction and Targeted Therapy. 2022 Sep 12;7(1):317. ★文库来源:购买自Addgene (#1000000049) 和元生物可提供本文所涉及的...
详细操作流程 1.设计sgRNA 如图1 分析中,显示你所键入的基因序列里有36对可选的guide序列。 如图2 分析结束,点击Downloadasgenbank查看结果,此时也会收到邮件。 如图3 选择分数较高的Guide序列,以Guide#1序列为例,2条单链oligo的序列如下:oligo1:5’-caccGCGTTCAAGTACCAGTTCGTG-3’;oligo2:5’-...
⚪ 一站式文库筛选服务 提供从sgRNA设计到质粒到病毒到细胞再到测序分析的全流程服务 参考文献: 1. Kweon, Jiyeon, and Yongsub Kim. “High-Throughput Genetic Screens Using CRISPR-Cas9 System.” Archives of Pharmacal Research, vol. 41, no. 9, 2018, pp. 875–884. ...