2. 慢病毒载体的构建及感染宿主细胞：将sgRNA文库进行慢病毒包装，并以较低的病毒感染复数转导至Cas9表达细胞系，确保每个细胞只进入1个病毒，从而实现每个细胞只有一个基因被编辑。3. 阳性或阴性筛选：根据研究目的不同，CRISPR高通量筛选分为阳性筛选和阴性筛选。阳性筛选指施加一定的筛选压力（如药物），经文库扰动...
CRISPR/Cas9高通量文库筛选方法中,最关键的步骤是构建慢病毒载体。将sgRNA文库进行慢病毒包装,并以较低的病毒感染复数转导至Cas9表达细胞系,确保每个细胞只进入1个病毒,从而实现针对不同sgRNA相对应基因的功能筛选。 阳性或阴性筛选筛选 工作的另一项重要步骤是选择恰当的筛选策略。根据研究目的不同,CRISPR高通量筛选分为...
CRISPR/Cas9文库筛选技术可实现全基因组范围的高通量筛选,其针对每个基因设计3-10条sgRNA,利用芯片一次性合成数万条覆盖整个基因组的sgRNA探针,通过克隆构建载体库,经慢病毒包装后以低感染复数感染宿主细胞,使得理论上每个细胞整合一条sgRNA,构建获得覆盖全基因组的基因敲除细胞池;经过筛选后,提取基因组并针对整合的sgRNA...
404 -- 1:53 App CRISPR干货分享-CRISPR文库筛选实验流程 330 -- 0:46 App CRISPR文库筛选流程-Cas9稳转株构建 7255 7 31:23 App CRISPR文库筛选 462 -- 0:52 App CRISPR 文库筛选用单载体还是双载体? 811 -- 54:42 App 干货!CRISPR激活文库实验流程与应用 598 -- 1:21 App CRISPR文库筛选-sgR...
图2.慢病毒混合筛选工作流程。使用 LentiArray 慢病毒 Cas9 核酸酶选择杀稻瘟素抗性,生成表达 Cas9 的稳定细胞系。然后,以适当的 MOI 值用 LentiPool sgRNA 文库转导这些 Cas9 表达细胞,并进行嘌呤霉素抗性选择。然后对转导的细胞群施加选择性压力或处理,如药物或化学扰动物质。分离基因组 DNA 并通过 PCR 技术扩增...
图2:全基因组CRISPR/Cas9敲除文库筛流程及茶叶素诱导自噬抑制示意图。 Guan-Nan Li et al., Signal Transduction and Targeted Therapy. 2022 Sep 12;7(1):317. ★文库来源:购买自Addgene (#1000000049) 和元生物可提供本文所涉及的...
1 内源性高通量上调编码基因的慢病毒文库。 2 包含70290个sgRNA靶点慢病毒文库。 3 同时靶向23430个编码基因转录本。 4 文库慢病毒总量约 5*108TU。 ➤个性化定制CRISPR/cas9慢病毒文库 HYY服务优势: HYY拥有CRISPR ko (GeCKO) 慢病毒文库及CRISPRa (SAM) 慢病毒文库,提供从药物发现到一体化服务的整体解决...
1.在卵巢癌细胞转移模型中进行全基因组sgRNA文库的筛选 Fig. 1 A pooled genome-wide CRISPR screen in an ovarian cancer cell metastasis model 人GeCKO v2 CRISPR文库包含123,411个独特的sgRNAs,靶向19,050个蛋白编码基因,团队通过转导SKOV3细胞(MOI=0.3)并用嘌呤霉素筛选,产生突变的卵巢癌细胞池。然后,将SKOV...
百度文库 高校与高等教育 crispr-cas9进行全基因组的筛选crispr-cas9进行全基因组的筛选 1 2 3基。 4向离心管中加入质粒DNA和等体积的Opti-MEM,混匀,调整总体积为2.5 ml,在室温下温育5分钟。 5将Lipofectamine 2000试剂轻柔摇匀,取100 μl Lipofectamine 2000试剂在另一管中与2.4 ml Opti-MEM混合,在室温下...
这是首次关于CRISPR文库的研究,显示出比shRNA文库更有效的筛选效果。但在文库设计初始,对sgRNA活性规则知之甚少,而非活性和非特异性的sgRNA会降低文库有效基因的覆盖率及靶基因的准确性。(关于CRISPR/Cas9系统详细介绍可点击查看:CRISPR/Cas9文库) 此后,随着技术的迭代升级,基于CRISPR/Cas9的工具也得到了快速发展,2016...