1、所有实验的原始数据（包括实验过程、实验试剂与设备等）；2、gRNA文库质粒：一份质粒、一份大肠杆菌菌液（25%甘油菌）；3、gRNAs详情。文献示例 文献示例 图 全基因组人类 CRISPR-Cas9 sgRNA 文库（Gonçalves et al., 2021）。 参考文献 Gonçalves E, Thomas M, Behan FM, et al. Minimal genome-wide...
单基因敲除研究路线图 文库筛选路线图 巴菲尔crispr/cas9文库筛选服务可以完成精准sgRNA序列的设计并精确人工合成,在基因敲除成功后,对测序结果进行基因表达谱分析、染色体DNA拷贝数统计等,最终实现从sgRNA设计、合成到功能分析的一体化服务。 整个流程是这样的: 1、你提供科研方向 2、项目评估(是否具有创新性、是否适合...
新一代基因编辑技术CRISPR/Cas9以其操作简单和通用的独特优势,成为开展正向遗传学筛选实验强有力的工具。基于CRISPR/Cas9技术建立的可能与某类功能相关的突变体库——CRISPR/Cas9文库又称全基因组CRISPR-Screen,或高通量基因编辑技术。
CRISPR文库是基于CRISPR/Cas9技术建立的高通量基因筛选方案。通过高通量合成sgRNA构建质粒文库,包装为慢病毒后以低MOI(通常<0.3)感染待筛选细胞,确保一个细胞只进入一种sgRNA,再给细胞加以筛选因素(如药物处理、低氧处理、病毒感染或细胞本身的生存能力等),收集筛选后的细胞进行NGS测序,分析实验组与对照组之间sgRNA的富集...
(仅供参考)某公司内部的CRISPR-Cas9操作流程 Genloci Classic CRISPR-Cas9内部操作流程 Genloci Classic CRISPR-Cas9内 部操作流程 Protocol No. PT140726-1
图1 CRISPR sgRNA文库筛选流程图 一、CRISPR文库筛选的应用 01 大规模基因扰动筛选 文库细胞筛选利用CRISPR-Cas9系统靶向大量基因,允许研究者在一个实验中大规模并行地编辑多个基因。经过基因编辑后的细胞在特定条件下进行筛选,如药物处理或环境变化,筛选出与这些条件相关的功能基因。比如,筛选药物处理后对细胞存活有关键...
流程图: 单基因敲除研究路线图 文库筛选路线图 巴菲尔crispr/cas9文库筛选服务可以完成精准sgRNA序列的设计并精确人工合成,在基因敲除成功后,对测序结果进行基因表达谱分析、染色体DNA拷贝数统计等,最终实现从sgRNA设计、合成到功能分析的一体化服务。 整个流程是这样的: ...
图4 sgRNA文库筛选流程图 CRISPR/Cas9的应用 1、药物靶点确定与验证 CRISPR-Cas9筛选技术可以应用于药物靶点筛选中,通过大规模筛选技术,可以系统的分析、验证一些与抗药性相关的基因,从而为疾病治疗提供相关数据。美国加州大学圣地亚哥分校的研究人员在国际顶尖学术期刊Nature子刊Nature Cancer期刊上发表的题为“An in vivo...
CRISPR-Cas9操作流程 Genloci Classic CRISPR-Cas9内 部操作流程 Protocol No. PT140726-1
文库筛选流程图 三、二代测序(NGS)在CRISPR screen中的应用 NGS作为一种高通量测序技术,能够快速、准确地测定大量DNA片段的序列信息。在CRISPR screen中,NGS主要用于以下两个方面: (1)sgRNA库的质检:在实验开始前,利用NGS对sgRNA库进行质控,确保文库中的每个sgRNA都得到充分代表,并且文库的多样性符合预期。