2. 慢病毒载体的构建及感染宿主细胞：将sgRNA文库进行慢病毒包装，并以较低的病毒感染复数转导至Cas9表达细胞系，确保每个细胞只进入1个病毒，从而实现每个细胞只有一个基因被编辑。3. 阳性或阴性筛选：根据研究目的不同，CRISPR高通量筛选分为阳性筛选和阴性筛选。阳性筛选指施加一定的筛选压力（如药物），经文库扰动...
图2.慢病毒混合筛选工作流程。使用 LentiArray 慢病毒 Cas9 核酸酶选择杀稻瘟素抗性,生成表达 Cas9 的稳定细胞系。然后,以适当的 MOI 值用 LentiPool sgRNA 文库转导这些 Cas9 表达细胞,并进行嘌呤霉素抗性选择。然后对转导的细胞群施加选择性压力或处理,如药物或化学扰动物质。分离基因组 DNA 并通过 PCR 技术扩增...
首先,我们需要构建一个慢病毒文库。这个文库将包含所有可能的GRNA,它们能够靶向我们感兴趣的基因。 文库病毒感染细胞 🦠 接下来,将这个文库病毒感染到细胞中。病毒感染后,细胞会表达出相应的GRNA,从而对基因进行剪切。 细胞实验筛选 🔍 在细胞实验中,我们可以通过观察细胞的生长、增殖等变化来筛选出阳性或阴性的基因。
CRlSPR/Cas9 gRNA文库筛选大体流程分为五步，即gRNA文库选择，gRNA文库扩增，gRNA文库慢病毒包装，gRNA文库筛选，PCR扩增和NGS测序。常用的筛选技术包括CRISPR敲除筛选，激活筛选，抑制筛选。高通量sgRNA文库筛选流程 CRISPR敲除筛选 在CRISPR-Cas9的作用下通过NHEJ或HDR进行全基因组不可逆基因消融，然后筛选由此产生的表型...
⚪ 定制文库 根据基因LIST进行文库定制,多种载体可选,提供NGS质检 ⚪ 一站式文库筛选服务 提供从sgRNA设计到质粒到病毒到细胞再到测序分析的全流程服务 参考文献: 1. Kweon, Jiyeon, and Yongsub Kim. “High-Throughput Genetic Screens Using CRISPR-Cas9 System.” Archives of Pharmacal Research, vol. 41...
CRISPR文库筛选x单细胞测序的结合应用 348 0 58:40 App 【直播回顾】带你轻松掌握CRISPR文库筛选技巧 1081 0 01:56 App 一文带你了解Prime Editing(PE)先导编辑的发展 506 0 00:52 App CRISPR 文库筛选用单载体还是双载体? 372 0 00:46 App CRISPR文库筛选流程-Cas9稳转株构建 893 0 54:42 App 干货!
CRISPR/Cas9高通量文库筛选方法中,最关键的步骤是构建慢病毒载体。将sgRNA文库进行慢病毒包装,并以较低的病毒感染复数转导至Cas9表达细胞系,确保每个细胞只进入1个病毒,从而实现针对不同sgRNA相对应基因的功能筛选。 阳性或阴性筛选筛选 工作的另一项重要步骤是选择恰当的筛选策略。根据研究目的不同,CRISPR高通量筛选分为...
CRISPR-SCREEN筛选详细流程 CRISPR文库是基于CRISPR/Cas9技术建立的高通量基因筛选方案。通过高通量合成sgRNA构建质粒文库,包装为慢病毒后以低MOI(通常<0.3)感染待筛选细胞,确保一个细胞只进入一种sgRNA,再给细胞加以筛选因素(如药物处理、低氧处理、病毒感染或细胞本身的生存能力等),收集筛选后的细胞进行NGS测序,分析实验...
图2:全基因组CRISPR/Cas9敲除文库筛流程及茶叶素诱导自噬抑制示意图。 Guan-Nan Li et al., Signal Transduction and Targeted Therapy. 2022 Sep 12;7(1):317. ★文库来源:购买自Addgene (#1000000049) 和元生物可提供本文所涉及的...