CRISPR-Cas12a是CRISPR-Cas12家族中使用最频繁的一种,由于顺势疗法和反切割特性,它为生物传感器设计提供了多种选择。由于受体可用性和实用性的限制,基于CRISPR-Cas12a的生物传感器的特异性和灵敏度还有待进一步提高。此外新开发的基于CRISPR-Cas12a的应用和方法推动...
激活后的cas12a会首先在靶DNA的crRNA结合位点产生双链断裂，切出一段DNA片段；然后会对周围DNA进行非特异性切割，产生较短DNA片段。这实现了对靶DNA的内切和信号放大。6. 自身调控: cas12a在激活后也会逐渐失去活性，这在一定程度上限制了其非特异性DNA内切的范围。但在DNA浓度高的条件下，仍可能产生较大范围的...
CRISPR/Cas12a纳米机器在活细胞中具有优异的RNA识别能力和胞内成像性能,融合了精准识别、高效运转与自动化操作等特性,同时展现了组件更换的设计灵活性,为开发新的CRISPR工具提供了一种个性化定制平台。 该工作发现RNA可以直接激活CRISPR/Cas12a系统的反式割活性,这一发现打破了之前仅限于DNA激活的认知,并揭示了RNA与DNA...
CRISPR Cas12a在WED结构域中具有核糖核酸酶位点,其允许将pre-crRNA自主形成成熟的crRNA。CRISPR Cas12acrRNA明显短于CRISPR Cas9向导RNA(sgRNA或crRNA++tracrRNA)。概括的来说,这允许紧凑的Cas12a CRISPR阵列,可用于同时靶向多个位点。一旦与CRISPR Cas12a蛋白结合,crRNA的重复衍生部分就采用5'伪结构。在crRNA的间隔区衍...
为了突破活细胞应用瓶颈,彭汉勇团队基于上述Cas12a新功能,构建了一种高度集成的RNA激活CRISPR/Cas12a纳米机器,用于活细胞中特征miRNA的成像。通过将CRISPR/Cas12a系统及其报告基因组装到纳米金球表面,实现在胞内外CRISPR体系中各组分的化学计量比始终保持不变,不受进胞量的影响。同时,在纳米金表面的有限纳米空间内,Cas12a...
摘要:CRISPR/Cas系统是近年来被广泛应用于基因组编辑的一项新兴技术,其中CRISPR/Cas12a技术由于具有独特的优势,受到越来越多的关注 基因组编辑(genomeediting)是对细胞内的目标遗传物质进行特定改造的一种技术,包括DNA删除、替换、插入、易位、点突变等。基因组编辑技术在分子生物学领域发挥着重要作用,通过对目的基因进行...
摘要:CRISPR/Cas系统是近年来被广泛应用于基因组编辑的一项新兴技术,其中CRISPR/Cas12a技术由于具有独特的优势,受到越来越多的关注 基因组编辑(genomeediting)是对细胞内的目标遗传物质进行特定改造的一种技术,包括DNA删除、替换、插入、易位、点突变等。基因组编辑技术在分子生物学领域发挥着重要作用,通过对目的基因进行...
图B.Cas12a RNP形成的R回路示意图。R环的形成方向用虚线箭头表示。DNA中RuvC的大致切割位置用深蓝色三角形表示,但两条链都是被一个催化位点切割的。 Cas12a蛋白结合PAM直接导致PAM下游靶序列DNA的局部熔化。这可以让下游序列与crRNA寻求互补。 crRNA碱基与DNA靶链配对,进一步融合DNA,将异源双链体延伸至PAM远端...
cas12a来源于微生物的CRISPR-Cas免疫系统,是其中一种type V CRISPR系统中的效应分子。 2. 结构: cas12a是一个多功能蛋白,包含RNA结合域、核酸酶域和DNA结合域。其中核酸酶域具有DNA内切酶活性,可以在激活后非特异性地切割DNA。 3. 指导RNA: cas12a需要与crRNA结合才具有活性,crRNA与其靶DNA互补的序列决定了cas12...
最近，美国爱荷华州立大学的研究人员在Nuleic Acids Research 期刊上发表名为CRISPR-Cas12a exhibits metal-dependent specificity switching的论文，该研究揭示了Cas12a表现出金属依赖的特异性转换的结果。Cas12a的特异性是由crRNA和DNA靶标之间的互补性、DNA靶标旁边的原间隔短回文序列邻近基序（protospacer adjacent motif...