这个方法能在短时间内（一般小于一个小时）高效地进行扩增，并且可以通过肉眼观察扩增结果（如加入荧光剂）。2. RPA（重组酶聚合酶扩增）特点: RPA技术在室温或接近室温条件（37°C-42°C）下工作，无需特殊设备。RPA通过使用重组酶来解开双链DNA，在较短时间内完成目标DNA的扩增。3.NASBA（核酸序列依赖的扩增）...
一、背景介绍: (一)RPA RPA,即重组酶聚合酶扩增技术,是在由多种酶和蛋白的参与下,在恒温条件下实现核酸指数扩增的技术,被称为是可以替代PCR的核酸检测技术。 不同于PCR技术,RPA属于等温扩增技术(isothermal amplification technology,ITA)是近年来发展起来的基于恒温扩增的新型核酸扩增技术,主要包括环介导等温扩增(LA...
总之,Crispr/cas系统和RPA技术联合应用有很大的潜力,可以在医学、农业、生物科技等领域推动技术的发展和应用。
总之,Crispr/cas系统和RPA技术联合应用有很大的潜力,可以在医学、农业、生物科技等领域推动技术的发展和应用。
技术平台:RPA或RDA 3. 准确发现靶标,放大检测信号 技术平台:SHERLOCK、SHERLOCK v2及DETECTR 从原理上来说, CRISPR分子诊断方法实际上是将扩增方法与Cas蛋白的检测相结合。CRISPR检测在提高灵敏度的同时,也提高了特异性,而且降低了对仪器依赖。另外,经过方法优化,CRISPR检测也做到了多靶标、一步法定量检测、DNA和RNA...
CRISPR/Cas技术在核酸检测中的使用需要前置扩增或后置扩增。通过将CRISPR/Cas技术与PCR或等温扩增，如LAMP、RPA、NASBA和RCA等方法相结合，开发了新一代的分子诊断方法，可以高灵敏度和特异性检测DNA和RNA。03 LAMP-CRISPR 基于LAMP的CRISPR技术是近年来研发出用于病原体检测的新一代分子诊断技术，这种技术的结合应用...
将CRISPR-Cas12a与LAMP、RPA等各种等温扩增(IA)技术相结合的检测法可以实现对核酸的超灵敏检测,并且具有价格合理、携带方便、快速等优势,非常适合在现场使用。如运用CRISPR-Cas12a技术所研发的核酸试纸条已实现布鲁氏菌感染菌株中野毒株和S2疫苗株的鉴别诊断,可用于...
重组酶聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)技术能在恒温条件下扩增痕量级(含量<0.1 mg)核酸模板[13],研究人员发现与RPA技术结合后,核酸检测系统的灵敏度有很大提升,能准确检测1 μl样品中的单个核酸分子。研究人员首先将目标模板经过RPA...
近日来自中国农业科学院家禽研究所的龚建森博士团队联合扬州大学和美国奥本大学的研究人员通过将RPA等温扩增技术与CRISPR/Cas12b检测系统相结合,成功构建了适合Salmonella enterica serovar Indiana(印第安纳沙门氏菌,一种国内目前流行的沙门氏菌血清型)的一步法RPA-CRISPR/Cas12b快检技术体系。该研究创新性地实现在一管...
SHERLOCK诊断系统:2017年,张峰及其同事提出了一种结合靶基因预扩增技术(RPA或RT-RPA)与Cas13a酶活的诊断平台——SHERLOCK诊断系统(图2)[2]。该系统表现出的单分子检测灵敏度及单碱基的特异性是CRISPR诊断领域中具有里程碑意义的重要工作,然而其只能定性而不能定量检测,同时在扩增与检测之间需要开盖转移易造成气溶胶...