一、背景介绍: (一)RPA RPA,即重组酶聚合酶扩增技术,是在由多种酶和蛋白的参与下,在恒温条件下实现核酸指数扩增的技术,被称为是可以替代PCR的核酸检测技术。 不同于PCR技术,RPA属于等温扩增技术(isothermal amplification technology,ITA)是近年来发展起来的基于恒温扩增的新型核酸扩增技术,主要包括环介导等温扩增(LA...
这个方法能在短时间内（一般小于一个小时）高效地进行扩增，并且可以通过肉眼观察扩增结果（如加入荧光剂）。2. RPA（重组酶聚合酶扩增）特点: RPA技术在室温或接近室温条件（37°C-42°C）下工作，无需特殊设备。RPA通过使用重组酶来解开双链DNA，在较短时间内完成目标DNA的扩增。3.NASBA（核酸序列依赖的扩增）...
这个方法能在短时间内(一般小于一个小时)高效地进行扩增,并且可以通过肉眼观察扩增结果(如加入荧光剂)。 2. RPA(重组酶聚合酶扩增) 特点: RPA技术在室温或接近室温条件(37°C-42°C)下工作,无需特殊设备。RPA通过使用重组酶来解开双链DNA,在较短时间内完成目标DNA的扩增。 3.NASBA(核酸序列依赖的扩增) 特点:...
2023年5月11日,中国科学院深圳先进技术研究院合成生物学研究所马英新课题组与湖北大学印文博士合作,在Analytical Chemistry期刊上发表了题为:Fluorescence and Colorimetric Analysis of African Swine Fever VirusBased on RPA-Assisted CRISPR/Cas12a Strategy 的补充封面论文。 该论文首次构建了基于RPA-CRISPR/Cas12a系统...
用RPA扩增ASFV基因序列,获得扩增子,扩增子与Cas12a-crRNA复合物结合,激活Cas12a反式切割活性,切割MB-ssDNA-ALP上的ssDNA,释放ALP;ALP催化pNPP水解生成pNP,引起比色信号变化,再加入量子点作为荧光报告子,实现比色和荧光的双模式信号输出。 图1:探针构建及ASFV检测原理图。biotin-ssDNA-azide与DBCO-ALP通过点击化学...
Crispr/cas系统和RPA技术的联合应用优势 1.特异性高 利用Crispr/cas系统可精准定位和切割目标DNA序列,避免背景噪声和误测率。 2.敏感性高 RPA技术可以在体外快速扩增靶向序列,使其扩增产物达到可检测程度。 3.操作简便 该联合技术可以在等温条件下进行,不需要仪器和复杂的反应条件,操作简单便捷。
本研究建立的 RPA - CRISPR/Cas13a 检测方法,通过优化反应体系、核酸提取方法和病毒富集过程,实现了对水环境中 NoV GII.4 的高灵敏度、高特异性、快速定量检测,检测时间短于 qPCR 方法,且成本低。该方法适用于现场检测,尤其是资源有限地区的病毒即时检测,有助于加强公共卫生监测,预防诺如病毒的大规模传播。考虑到...
RPA依赖三种酶：重组酶、单链DNA结合蛋白(SSB)和链置换DNA聚合酶，混合物在常温下有活性，最佳反应温度在37-42°C左右。RPA技术反应快速，一般可在十分钟内获得可检出水平的扩增产物。CRISPR技术是生物界的新宠，用于基因组编辑，具有强大的工具能力，能够精准、简便地编辑基因或基因组信息，对生物体内代谢...
该系统首先对靶基因进行扩增(RPA或RT-RPA恒温扩增),再将扩增产物转录为RNA分子,与Cas13a/crRNA特异结合形成复合物,激活Cas13a的反式切割活性,对体系中荧光标记的FQ-ssRNA探针进行切割,发出荧光。该系统展现出的单分子级别的检测灵敏度及单碱基的特异性,是CRISPR-Dx领域...
该技术利用重组聚合酶扩增(RPA)和CRISPR-Cas9酶来检测各种类型样本中的RNA和DNA,本周发表在《ACS CENTRAL SCIENCE》杂志上的一篇新论文[1]描述了这一技术。 埃因霍温科技大学的生物医学工程教授Maarten Merkx说,研究人员被创造一种分子测试替代PCR的愿望所驱使,要知道PCR在SARS-CoV-2大流行期间至关重要,但需要特定的...