近日,来自中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室的研究人员在Viruses期刊特刊“CRISPR/Cas in Viral Research 2024”上报告了一种基于RT-RPA和CRISPR/Cas12a的快速检测H5亚型禽流感病毒的新方法。在这项研究中,作者成功开发并验证了RT-RPA/CRISPR检测方法,证明了其对H5亚型AIV的特异性、灵敏性、便...
工作流程与体系构建:建立了一锅法 RPA CRISPR/Cas12a 检测 DENV 的工作流程。先从感染样本中提取核酸作为模板,用基于 DENV 四种血清型保守区域设计的通用引物进行 RT-RPA 扩增,再将 CRISPR/Cas12a 检测反应体系通过离心与扩增产物混合,利用 FAM 标记的单链 DNA 报告分子进行检测,整个过程 40 分钟内完成,并成功建...
17、再进一步的,本发明还提出了所述的基于rt-rpa和crispr-cas13a的塞内卡病毒核酸检测组合物用于非疾病诊断的一步法检测塞内卡病毒的方法,包括以下步骤: 18、将rpa扩增与crispr-cas13a酶切反应合并在单管内进行,反应体系为50μl:将abuffer 29.5μl、上下游引物各2μl以及b buffer2.5μl加入到rpa干粉管内,重悬使...
近日,来自中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室的研究人员在 Viruses 期刊特刊“CRISPR/Cas in Viral Research 2024”上报告了一种基于RT-RPA和CRISPR/Cas12a的快速检测H5亚型禽流感病毒的新方法。在这项研究中,作者成功开发并验证了RT-RPA/CRISPR检测方法,证明了其对H5亚型AIV的特异性、灵敏性...
核心提示:近期,一项基于RT-RPA(逆转录重组酶聚合酶等温扩增)和CRISPR/Cas12a-LFS(侧流层析)技术的新型核酸检测方法被成功建立,为诺如病毒的检测提供了新的技术手段。 引言 诺如病毒(Norovirus)是引起急性胃肠炎暴发的主要病原体之一,尤其在封闭环境和集体场所中传播迅速。GII.2基因型作为诺如病毒中较为常见的一种...
RT-RPA/CRISPR这种检测方法利用逆转录重组酶聚合酶扩增 (RT-RPA) 和CRISPR/Cas12a的检测原理。在该检测系统中,通过RT-RPA对提取的核酸中的目标基因片段进行扩增。然后,目标DNA被特异性crRNA识别,并与Cas12a形成三元复合物,顺式切割目标DNA,Cas12a无差别地反式切割ssDNA探针 (5'-FAM-TTATT-3'-BHQ1-标记) 或 ...
1、本发明要解决的技术问题是克服上述缺陷,提供一种对两种临床常见抗原核酸的高灵敏、高特异、高灵敏检测,适用于基层兽医站及临床快速检测,结果稳定可靠的基于rt-rpa与crispr技术的猪流感和蓝耳病试纸条检测系统。 2、为解决上述技术问题,本发明提供的技术方案为:一种基于rt-rpa与crispr技术的猪流感和蓝耳病试纸条...
CRISPR/Cas13a检测体系又称之为“SHERLOCK”,借助于Case13a识别并剪切特定的单链RNA的片段,该技术已经成功应用于临床上其他类型病毒的快速检测。同时,该技术也在新冠病毒检测在实验室里得到验证。CRISPR/12a是一类借助Cas12a蛋白识别并剪切双...
RPA-CRISPR/Cas12a检测方法的基础上设计微流控芯片并应用于样本检测.结果:(1)本研究选择 NoVs 的 RNA 聚合酶(RNA-dependent RNA polymerase,RdRp)与衣壳蛋白(Virusparticle 1,VP1)基因的连接处作为检测靶标,并构建了GⅡ.4,GⅡ.3以及GI.1型NoVs质粒模板.(2)本研究成功筛选出GⅠ,GⅡ型NoVs的高效RPA引物,...
重组酶聚合酶扩增(RPA)以及重组酶介导扩增(Recombinase aided amplification,RAA)因其快速、简便、等温而成为现场诊断的首选扩增技术,但可能存在非特异性扩增的假阳性问题。规律成簇的间隔短回文重复序列(Clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)具有良好的特异性和可靠性。RPA与CRISPR的结合可以兼具...