可以使用多种方法来检测扩增的DNA，如终点法检测、实时定量分析、侧向流动测定以及CRISPR-Cas系统。图 1. 重组酶聚合酶扩增（RPA）。在ATP存在的情况下，由UvsX和UvsY蛋白组成的重组酶复合物与引物结合开始RPA反应。该复合物在DNA上寻找同源序列，并促进DNA链的打开和引物的结合。单链DNA结合蛋白（Gene 32蛋白）稳定...
对四种水样进行定性和定量检测,结果显示 RPA - CRISPR 检测与 qPCR 检测结果一致,病毒载量无显著差异,表明该方法对不同水环境中的 NoV GII.4 监测具有良好的可靠性和实用性。 图3.使用 RPA/CRISPR 检测和 qPCR 对 4 个水样进行病毒富集并得到检测结果。(A) 水样中病毒富集过程的示意图;(B) 优化病毒洗脱液...
近年来,RPA技术在多个方面取得了显著进展: 1. 便携式设备:随着便携式检测设备的发展,RPA技术在现场检测中的应用变得更加广泛。例如,结合微流控芯片技术的便携式RPA设备可实现快速、现场的检测。 2. 多重检测:研究者开发了多重RPA技术,可同时扩增和...
这么牛叉的技术，然后呢？然后我有两个核心事件跟大家分享一下。①2017年张峰团队在Science上发表了一篇文章，题为“Nucleic acid detection with CRISPR-Cas13a/C2c2”，是讲了他们利用VI型CRISPR系统（图1）中Cas13a核酸酶的特点，即识别特定目标RNA后，可以大量切割旁系RNA，来实现特定核酸检测的一种应用理念。他们...
Crispr/cas系统和RPA技术的联合应用可实现对靶向基因的高效检测和修饰。其中Crispr/cas系统可引导修饰特定的基因,而RPA技术则可以实现在样本中定量检测靶向基因的扩增产物,从而实现快速高效的基因检测。 Crispr/cas酶 重组CRISPR-Cas9蛋白 重组CRISPR-Cas12a蛋白 ...
顶级学术期刊Nature和Science连发论文将CRISPR改造成了灵敏度达到了阿摩尔级(10的负18次方摩尔每升),可以检测单分子的技术。而这其中其中重要作用的两个个关键因素就是RPA和CRISPR。 一、背景介绍: (一)RPA …
(2)RPA可于25~42℃反应,无须热循环,最适反应温度为37℃左右,该温度位于CRISPR/Cas系统的反应温度范围内,而两者的结合也推进了下一代分子诊断技术的发展(传说中的CRISPR/Cas分子诊断技术到底是个啥?);(3)反应速度快,5~30分钟即可达到检出水平,适用于POCT领域;(4)扩增引物长度为30~35bp,荧光探针长度为46~52...
(2)RPA可于25~42℃反应,无须热循环,最适反应温度为37℃左右,该温度位于CRISPR/Cas系统的反应温度范围内,而两者的结合也推进了下一代分子诊断技术的发展(传说中的CRISPR/Cas分子诊断技术到底是个啥?);(3)反应速度快,5~30分钟即可达到检出水平,适用于POCT领域;(4)扩增引物长度为30~35bp,荧光探针长度为46~52...
CRISPR/Cas技术检测食源性致病菌 致病菌的CRISPR/Cas核酸传感器检测可分为两大类:①通过增菌后提取基因组,结合核酸扩增和Cas蛋白的剪切体系建立的核酸传感器。②结合适配体实现致病菌向核酸的转化,随后直接或间接与CRISPR/Cas系统结合,建立相应的传感器[5]。在上文中,我们提到了5种常见的食源性致病菌,接下来,编者将以...
随后,链置换DNA聚合酶在单链模板上延伸,引物从而完成扩增过程。整个反应通常在37-42℃的恒温条件下进行,无需热循环仪,非常适合在现场条件下检测各种病原体。通过将反转录酶纳入反应,RPA也可以用来检测RNA靶标。可以使用多种方法来检测扩增的DNA,如终点法检测、实时定量分析、侧向流动测定以及CRISPR-Cas系统。