Co-IP实验操作步骤 一、原理: 免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。其原理是:当细胞在非变性条件下被裂解时,完整细胞内存在的许多蛋白质-蛋白质间的相互作用被保留了下来。如果用蛋白质...
5. beads聚集:未按步骤预洗beads。
🔍 CO-IP实验步骤: 1️⃣ 选择细胞:以6cm培养皿为例,用1xPBS轻轻清洗细胞,避免细胞丢失。直接加入700ul预冷的RIPA裂解液(使用前加入终浓度1mM的PMSF和PI),4度下摇晃裂解3小时。注意,不建议使用胰酶消化离心收集细胞,因为胰酶会伤害膜蛋白,离心也会造成细胞损失或破碎。对于293T细胞,可以用裂解液轻轻吹打使...
实验步骤。 1. 细胞培养与处理。 根据实验目的,培养适量的细胞,并对细胞进行相应的处理,如刺激、转染等,以诱导或调节目标蛋白质的表达和相互作用。 2. 细胞裂解。 去除细胞培养液,用预冷的PBS(磷酸盐缓冲液)洗涤细胞2-3次,以去除残留的培养液和血清等成分。 向培养皿或培养瓶中加入适量预冷的细胞裂解液,通常...
Co-IP(动物)实验原理与操作步骤讲解,手把手教学!, 视频播放量 1608、弹幕量 0、点赞数 51、投硬币枚数 6、收藏人数 185、转发人数 5, 视频作者 金开瑞生物, 作者简介 实验问题咨询及生物类合作咨询:13343461158; 蛋白抗体、检测分析/分子互作、基因/引物合成各生物领域
这篇文章将详细介绍核蛋白Co-IP实验的步骤,并一步一步回答。 第一步:制备样品和抗体 在进行核蛋白Co-IP实验之前,首先需准备样品和相应的抗体。样品可以是细胞提取物或组织提取物。制备提取物的方法取决于研究对象和研究目的。 1.细胞提取:培养细胞并使用细胞裂解缓冲液(通常包含盐、洗涤剂和其他增效剂)裂解细胞膜...
🧬 大家好,今天我们来详细讲解一下免疫共沉淀(Co-IP)实验的具体步骤和需要注意的事项。📌 实验步骤: 1️⃣ 准备样品:将待检测的蛋白质样品准备好,确保其纯度和浓度。 2️⃣ 抗体偶联:将目标蛋白的抗体与磁珠或琼脂糖珠偶联,形成免疫复合物。
Co-IP实验步骤 一、制备细胞样品 1.10cm盘细胞用PBS清洗两次,加入1mL RIPA裂解液和10μL PMSF (100mM稀释至1mM); 2.充分混匀吹打后,冰上裂解4h,充分吹打吸入1.5mL EP管中, -80℃保存; 3.取出样品,1200rpm离心10min,取上清弃沉淀,测定蛋白浓度。 二、Co-IP,拉出蛋白 1.每管取出少量蛋白样(15~30μL...
CO-IP实验步骤 1. 样品准备：收集细胞或组织样品，并进行细胞裂解或组织破碎，得到总蛋白提取物。2. 抗体结合：将目标蛋白的特异性抗体与蛋白A/G磁珠结合，形成抗体磁珠复合物。3. 免疫沉淀：将抗体磁珠复合物加入总蛋白提取物中，使抗体与目标蛋白结合，形成免疫复合物。4. 洗涤：用洗涤缓冲液洗涤免疫复合物，...