免疫共沉淀Co-IP实验操作步骤 免疫共沉淀Co-IP实验操作步骤 一、原理: 免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。其原理是:当细胞在非变性条件下被裂解时,完整细胞内存在的许多蛋白质-蛋白质...
5. beads聚集:未按步骤预洗beads。
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3. 共免疫沉淀（CO-IP）实验步骤 CO-IP实验是在IP的基础上，通过特异性抗体结合的目标蛋白质来寻找与其相互作用的蛋白质。以下是CO-IP实验的步骤：3.1 IP实验 首先，进行IP实验，将目标蛋白质与特异性抗体结合，并将其沉淀下来。3.2 洗涤 对IP实验得到的沉淀物进行洗涤，以去除非特异性结合的蛋白质和其他杂质...
CO-IP实验步骤 1. 样品准备：收集细胞或组织样品，并进行细胞裂解或组织破碎，得到总蛋白提取物。2. 抗体结合：将目标蛋白的特异性抗体与蛋白A/G磁珠结合，形成抗体磁珠复合物。3. 免疫沉淀：将抗体磁珠复合物加入总蛋白提取物中，使抗体与目标蛋白结合，形成免疫复合物。4. 洗涤：用洗涤缓冲液洗涤免疫复合物，...
免疫共沉淀Co-IP实验步骤 细胞转染 1.铺细胞,转染细胞。本次转染的两个蛋白分别带有FLAG和HA标签。 裂解细胞 2.去除培养基,PBS吹下细胞,离心去上清。将细胞沉淀转移到1.5mlEP管中,PBS洗,离心去上清,加1ml裂解液。 3.冰上孵育40min,每10min震荡一次。
这篇文章将详细介绍核蛋白Co-IP实验的步骤,并一步一步回答。 第一步:制备样品和抗体 在进行核蛋白Co-IP实验之前,首先需准备样品和相应的抗体。样品可以是细胞提取物或组织提取物。制备提取物的方法取决于研究对象和研究目的。 1.细胞提取:培养细胞并使用细胞裂解缓冲液(通常包含盐、洗涤剂和其他增效剂)裂解细胞膜...
Co-IP(动物)实验原理与操作步骤讲解,手把手教学! 专业生物实验视,手把手科普教学,一看就会!##青少年课外知识讲堂 #生物 #实验 #科普 #蛋白 - 小金博士于20240520发布在抖音,已经收获了3251个喜欢,来抖音,记录美好生活!
Co-IP实验步骤 一、制备细胞样品 1.10cm盘细胞用PBS清洗两次,加入1mL RIPA裂解液和10μL PMSF (100mM稀释至1mM); 2.充分混匀吹打后,冰上裂解4h,充分吹打吸入1.5mL EP管中, -80℃保存; 3.取出样品,1200rpm离心10min,取上清弃沉淀,测定蛋白浓度。 二、Co-IP,拉出蛋白 1.每管取出少量蛋白样(15~30μL...
免疫共沉淀(Co-IP实验)步骤 1 用磷酸盐缓冲液洗 30块 10 cm培养板上的适宜细胞。 刮去每块板上的细胞到 1 ml冰冷的 EBC裂解缓冲液中。 2 将每毫升细胞悬液转移到微量离心管中, 在微量离心机上 4 ℃以最大速度离心 15 min。 3 收集上清 (约 30 ml)并加入 30 μg的适当抗体, 4℃摇动免疫沉淀物 1...