⾸先需要说明的是，熟悉了解免疫共沉淀实验的原理及实验的操作流程是进⾏Co-IP结果图分析 的前提。在清楚知道Co-IP操作流程的前提下，弄清楚图中各个部分所代表的实验步骤，结合图 中展⽰的结果进⾏分析，便可以看懂Co-IP的实验结果图。Co-IP结果分析案例⼀ 该图为验证蛋⽩EDR1与蛋⽩EDR4之间是否...
3.须在实验前预测目的蛋白是什么，以选择最后检测的抗体，所以，若预测不正确，实验就得不到结果，方法...
当用预先固化在固体材料上的蛋白X的抗体结合X蛋白,那么与X蛋白在体内结合的Y蛋白也能一起沉淀下来。再通过蛋白变性分离,对Y蛋白进行WB、MS等分析,进而可证明两者间的相互作用。方便理解,直接上图: Co-IP原理简图 琼脂糖珠 长久以来,多孔的琼脂糖珠 (也称琼脂糖树脂) 作为免疫沉淀实验中的固相支持物常用的材料。
可能检测不到低亲和力和瞬间的蛋白质-蛋白质相互作用。 两种蛋白质的结合可能不是直接结合,可能有第三者起桥梁作用。 必须在实验前预测目的蛋白,选择检测抗体,若预测不正确,实验可能无结果。🎯 目的: 研究一种已知蛋白质与已知或未知蛋白质间的相互作用。🛠 实验步骤: 用RIPA裂解缓冲液裂解细胞。 用PBS配制50%...
利用内源性CO-IP实验为验证两个蛋白是否存在已知作用，如果最终的结果为阳性，则可以证明两个蛋白之间存在相互作用；但如果结果为阴性，无法证明两个蛋白之间不存在相互作用，也有可能是蛋白在细胞内表达量低等原因导致。因此在进行内源性CO-IP验证两个蛋白是否存在相互作用时，建议先做过表达CO-IP作为对照。Detaibio...
因此，Co-IP的实验步骤可大致概括为以下4步：（1）裂解蛋白，得到蛋白的混合物；（2）将靶蛋白的抗体与蛋白混合物共同孵育；（3）洗脱，得到拉下来的蛋白；（4）再将拉下来的蛋白当作样本，用其互作蛋白的抗体进行检测。图1 Co-IP实验原理及流程（伯远生物科研绘图）。Co-IP结果如何看？虽然了解过Co-IP的原理...
实验原理 实验流程 1.培养实验所需细胞2.外源性CO-IP需要转染外源质粒3.细胞裂解（常用RIPA并添加PMSF等酶抑制剂）4.免疫沉淀反应 ①磁珠预处理（protein A/G或HA等标签磁珠）②目标抗体与磁珠结合（一般抗体使用浓度为10-50ug/mL）③抗原沉淀反应（含有抗体的磁珠与细胞裂解液结合）④抗原洗脱（变性和非变性两种...
1、原理 Co-IP的原理是如果两个蛋白在体外体系能够发生特异性相互作用的话，那么当用一种蛋白的抗体进行免疫沉淀时，另一个蛋白也会被同时沉淀下来。基本原理也是抗原-抗体特异性结合，检测目的是蛋白间相互作用。2、实验步骤 Co-IP的实验步骤可大致概括为以下4步：（1）裂解蛋白，得到蛋白的混合物；（2）将靶...
1.co-ip实验的原理 co-ip实验的核心原理是利用特异性抗体将目标蛋白及其相互作用伙伴从复杂的细胞或组织提取物中共同沉淀下来。具体而言，该方法包括以下步骤：（1）细胞裂解和蛋白质提取；（2）抗体与目标蛋白结合形成免疫复合物；（3）将免疫复合物与亲和基质（如蛋白A/G琼脂糖珠）结合，实现蛋白质的富集；（4）...