1.未做IP实验，建议送细胞沉淀进行IP-MS检测。①细胞量不少于2×107（约两个10 cm培养皿，总蛋白量5mg左右）。一般来说，细胞量越多，IP-MS实验效果越理想。②其他样品：如组织、细菌和蛋白溶液等可根据蛋白含量进行换算。2.做完IP实验后，建议送Beads进行MS检测。①Beads用PBS缓冲液清洗干净，以Beads沉淀形式保...
免疫沉淀-质谱分析技术(IP-MS)是一种基于抗体和抗原特异性结合的原理研究蛋白间互作的技术。通过能与目的蛋白结合的磁珠孵化,将能与目的蛋白结合的蛋白与其他蛋白组分分离,再通过与质谱联用,对这些分离出来的蛋白组分进行定性鉴定。, 视频播放量 94、弹幕量 0、点赞数
IP-MS(免疫沉淀串联质谱分析)的过程主要包括以下几个步骤: 1、 样品制备 根据实验要求制备含有目标蛋白质的细胞裂解液或组织裂解液。 2、 免疫复合物制备 将抗体与磁珠或琼脂糖等固相载体结合,形成免疫复合物。 3、 样品处理 将免疫复合物加入样品中,使其与目标蛋白质结合。 4、 免疫沉淀 用磁珠或琼脂糖等固相...
IP-MS原理主要包括以下几个步骤: 1. 表达载体构建:将目标基因与荧光标签(如GFP)融合,构建表达载体。将构建好的载体转化到植物材料中,使目标基因表达并产生荧光信号。 2. 植物材料处理:将转化后的植物材料进行适当处理,如切片、破碎等,使细胞内的目标蛋白暴露出来。 3. 蛋白提取:利用蛋白提取试剂盒从植物材料中...
在IP-MS实验中,非胶内酶切的方法通常包括以下步骤: 1. 细胞裂解,将含有目标蛋白的细胞用裂解缓冲液裂解,释放出蛋白质。 2. 免疫沉淀,将特异性抗体与目标蛋白结合,形成抗原-抗体复合物。然后使用蛋白A/G琼脂糖或磁珠来沉淀抗原-抗体复合物。 3. 洗涤,对沉淀后的复合物进行多次洗涤,以去除非特异性结合的蛋白质...
4)将磁珠用裂解液平衡三次,加入步骤3中EP管,4 ℃颠倒混匀至少2个小时。 5)以磁力架分离磁珠,去掉上清溶液,用清洗液和置换液各清洗磁珠3次,去上清。 6)beads沉淀-80 ℃保存,可用于后续质谱检测,或SDS-PAGE预实验。 详细步骤可参考往期公众号文章“IP-MS 实验步骤”。
(2)IP-MS: 可以进一步定量分析蛋白的丰度和鉴定蛋白间的相互作用。 在定量分析中,关键指标包括Fold Change和Intensity。 Fold Change表示实验组与对照组间蛋白丰度的差异倍数。 Intensity则反映蛋白质的相对丰度。 根据实际情况设定合理的Fold Change阈值和P值,进而评估蛋白表达差异和统计学显著性。
答:IP-MS的完整流程通常包括: ①细胞裂解 ②细胞裂解液、抗体、Beads孵育 ③Beads清洗 ④蛋白洗脱 ⑤蛋白酶解和脱盐 ⑥质谱检测 ⑦数据分析 其中①-③步需由客户自行完成,实验步骤可参考《谱度众合 IP-MS 实验步骤》 样品可在第③步完成后寄送。WB等预实验可在第③步后分装样品进行。
IP-MS原理分为三个主要步骤:免疫沉淀、核心质谱分析和数据分析。 首先是免疫沉淀。实验开始时,科学家会使用抗体与感兴趣的蛋白结合。这些抗体可以是单克隆抗体或多克隆抗体,具体选择由实际需要决定。然后,这些抗体会与一些介质(如磁珠或琼脂糖)结合,以便后续的分离和富集。此时,生物样本中的目标蛋白也会结合在这些抗体...
步骤一：样本准备 在进行CO-IP-MS实验之前，首先需要准备样本。样本可以是细胞提取物、组织提取物或体液等。以下是样本准备的基本步骤：1.细胞培养：如果使用细胞样本，首先需要培养细胞并使其达到适当的生长状态。2.细胞裂解：将细胞收集并使用裂解缓冲液裂解细胞膜，释放细胞内的蛋白质。3.蛋白质浓度测定：使用蛋白...