⾸先需要说明的是，熟悉了解免疫共沉淀实验的原理及实验的操作流程是进⾏Co-IP结果图分析 的前提。在清楚知道Co-IP操作流程的前提下，弄清楚图中各个部分所代表的实验步骤，结合图 中展⽰的结果进⾏分析，便可以看懂Co-IP的实验结果图。Co-IP结果分析案例⼀ 该图为验证蛋⽩EDR1与蛋⽩EDR4之间是否...
免疫共沉淀(Co-IP)详细步骤教程 一、原理:免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。其原理是:当细胞在非变性条件下被裂解时,完整细胞内存在的许多蛋白质-蛋白质间的相互作用被保留了下来。
5、 每1 ml 总蛋白中加入100 μl Protein A琼脂糖珠(50%),4℃摇晃1 h以去除非特异性杂蛋白,降低背景。 6、4℃,14000g离心15min,将上清转移到一个新的离心管中标号Input,留Protein A珠子,标号IP。 7、变性以及还原蛋白 室温溶解蛋白上样缓冲液(5×),按照4 uL蛋白样品+1 ul (5×)的比例混合,IP组...
5. beads聚集:未按步骤预洗beads。
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Co-IP 协议与传统的 IP 协议非常相似,不同之处在于 Co-IP 需要更温和的测定条件来保持与结合伙伴的相互作用。 一般步骤如下(图1)。 图1:标准 Co-IP 协议中的步骤。 1. 裂解你的细胞 在这里,您轻轻地打开您的细胞,使您的蛋白质接触到抗体。 裂解方法在 Co-IP 中很重要。 非去污剂、低盐裂解缓冲液是...
因此，Co-IP的实验步骤可大致概括为以下4步：（1）裂解蛋白，得到蛋白的混合物；（2）将靶蛋白的抗体与蛋白混合物共同孵育；（3）洗脱，得到拉下来的蛋白；（4）再将拉下来的蛋白当作样本，用其互作蛋白的抗体进行检测。图1 Co-IP实验原理及流程（伯远生物科研绘图）。Co-IP结果如何看？虽然了解过Co-IP的原理...
CO-IP实验是在IP的基础上，通过特异性抗体结合的目标蛋白质来寻找与其相互作用的蛋白质。以下是CO-IP实验的步骤：3.1 IP实验 首先，进行IP实验，将目标蛋白质与特异性抗体结合，并将其沉淀下来。3.2 洗涤 对IP实验得到的沉淀物进行洗涤，以去除非特异性结合的蛋白质和其他杂质。3.3 目标蛋白质的酶解 对洗涤后...
CO-IP实验步骤 1. 样品准备：收集细胞或组织样品，并进行细胞裂解或组织破碎，得到总蛋白提取物。2. 抗体结合：将目标蛋白的特异性抗体与蛋白A/G磁珠结合，形成抗体磁珠复合物。3. 免疫沉淀：将抗体磁珠复合物加入总蛋白提取物中，使抗体与目标蛋白结合，形成免疫复合物。4. 洗涤：用洗涤缓冲液洗涤免疫复合物，...
除此之外CO-IP实验还会设置一个阳性对照组（Input组），Input组为直接利用抗体X（抗体Y）对细胞裂解液进行WB检测，验证细胞裂解液中存在蛋白X(抗体Y)。在某些CO-IP实验中，实验人员会把IP后的上清分别进行蛋白X和蛋白Y的WB检测，该对照组称为output组。免疫共沉淀的实验流程 免疫共沉淀实验流程为：收集蛋白样品—...