用抗HA抗体和protein A琼脂糖珠免疫沉淀SARD1-HA和CBP60g-HA染色质复合物。使用免疫球蛋白G(IgG)平行进行阴性对照反应。采用WRKY70启动子特异性引物对免疫沉淀的DNA样品进行实时定量PCR检测。ChIP结果以折叠变化表示,将ChIP的信号与IgG对照分离,设为1。(c)WRKY70在上述基因型中的表达与ACTIN1归一化。 小远叨叨 通...
用抗HA抗体和protein A琼脂糖珠免疫沉淀SARD1-HA和CBP60g-HA染色质复合物。使用免疫球蛋白G(IgG)平行进行阴性对照反应。采用WRKY70启动子特异性引物对免疫沉淀的DNA样品进行实时定量PCR检测。ChIP结果以折叠变化表示,将ChIP的信号与IgG对照分离,设为1。(c)WRKY70在上述基因型中的表达与ACTIN1归一化。 小远叨叨 通...
用抗PFKII抗体免疫沉淀源自弓形虫RH和ME49的可溶性蛋白,并用抗PFKII抗体检测沉淀的PFKII蛋白(箭头指示)。 通过IFA分析不同浓度的阴性IgG(小鼠IgG)对蛋白质乳酸化(绿色)没有影响。 抗TgPFKII抗体以浓度依赖性方式抑制蛋白质乳酸化(绿色)。 分别对用抗PFKII抗体和阴性对照抗体处理的组进行免疫荧光强度统计分析。采用...
通过IFA分析不同浓度的阴性IgG(小鼠IgG)对蛋白质乳酸化(绿色)没有影响。抗TgPFKII抗体以浓度依赖性方式抑制蛋白质乳酸化(绿色)。分别对用抗PFKII抗体和阴性对照抗体处理的组进行免疫荧光强度统计分析。采用Student t检验进行统计学显著性分析。所有数据均显示为平均值±标准差(N>10)。***,与对照组相比P<0.001。w...
最后阴性对照需要用阴性抗体,用普通的IgG做为抗体,理论上不会ChIP下来任何DNA片段,但是由于非特异结合,或者实验过程中没发生结合的DNA清除不完全,可能也会出现比较浅的条带。 注意, 上述所谓的阴性阳性对照都是针对具体的一次ChIP PCR实验而言的,只能说明这个实验做的有没有物理上的问题。 但是如果想说明的问题是对照...
对于ChIP-qPCR,Fry和他的团队建议使用正常IgG作为阴性对照来检测非特异性富集。对于ChIP-seq,在他看来,首选的阴性对照是输入染色质。作为ChIP-qPCR和ChIP-seq的阳性对照,实验室可以考虑已知结合目标蛋白的基因组区域或使用抗组蛋白H3的抗体作为“通用”阳性对照,因为如果染色质完整,IP试验成功,那么使用这种通用阳性对照...
用抗HA抗体和protein A琼脂糖珠免疫沉淀SARD1-HA和CBP60g-HA染色质复合物。使用免疫球蛋白G(IgG)平行进行阴性对照反应。采用WRKY70启动子特异性引物对免疫沉淀的DNA样品进行实时定量PCR检测。ChIP结果以折叠变化表示,将ChIP的信号与IgG对照分离,设为1。(c)WRKY70在上述基因型中的表达与ACTIN1归一化。
最后阴性对照需要用阴性抗体,用普通的IgG做为抗体,理论上不会ChIP下来任何DNA片段,但是由于非特异结合,或者实验过程中没发生结合的DNA清除不完全,可能也会出现比较浅的条带。 注意, 上述所谓的阴性阳性对照都是针对具体的一次ChIP PCR实验而言的,只能说明这个实验做的有没有物理上的问题。
通过IFA分析不同浓度的阴性IgG(小鼠IgG)对蛋白质乳酸化(绿色)没有影响。 抗TgPFKII抗体以浓度依赖性方式抑制蛋白质乳酸化(绿色)。 分别对用抗PFKII抗体和阴性对照抗体处理的组进行免疫荧光强度统计分析。采用Student t检验进行统计学显著性分析。所有数据均显示为平均值±标准差(N>10)。***,与对照组相比P<0.001...
阴性对照抗体是正常的兔IgG。细胞核用DAPI(蓝色)染色。 C. 使用抗乳糜蛋白酶抗体的弓形虫ME49的速殖子IFA分析(绿色)。阴性对照抗体是正常的兔IgG。细胞核用DAPI(蓝色)染色。 D. 赖氨酸乳酸化的LC-MS/MS数据。 E. 维恩图显示了从三次重复中获得的乳酸化蛋白质重叠部分。 F. 维恩图显示了从三次重复中获得...