慢病毒载体作为CAR转导T细胞的载体,是CAR-T细胞生产过程中的关键原料,对实现大规模生产、缩短生产周期具有重要意义。 01 慢病毒载体和CAR-T 慢病毒载体是一种源于人类免疫缺陷病毒(HIV)的基因载体。在构建慢病毒载体时,为了避免产生有复制能力的病毒,会把HIV-1基因组分装与不同的质粒中,再共转染细胞,获得只有一次感...
我们都知道目前制备CART是体外培养,成本高耗时久,今天学习8月底Blood发表的一篇文章,介绍了一种VivoVec™的技术,这是一种利用慢病毒载体在体内生成嵌合抗原受体(CAR) T细胞的方法,目的是克服目前CART细胞疗法在成本和制造复杂性方面的障碍。 VivoVec™平台是一种慢...
19年,中国国家药监局药品审评中心(CDE)正式受理了由诺华提交的CAR-T疗法CTL019(Kymriah)的临床试验申请,这也是全球首款获批的CAR-T疗法临床试验申请在华获得受理。而这其中用于感染T细胞的病毒载体就是慢病毒载体。 那么慢病毒载体究竟具有哪些独特的优势吸引了科学家的注意力呢?下面我们就来深度剖析一下吧～ 慢病毒...
19年,中国国家药监局药品审评中心(CDE)正式受理了由诺华提交的CAR-T疗法CTL019(Kymriah)的临床试验申请,这也是全球首款获批的CAR-T疗法临床试验申请在华获得受理。而这其中用于感染T细胞的病毒载体就是慢病毒载体。 那么慢病毒载体究竟具有哪些独特的优势吸引了科学家的注意力呢?下面我们就来深度剖析一下吧～ 慢病毒...
为了在体外产生CAR-T细胞,慢病毒载体(LVs)由于其可以稳定的将大片段DNA有效的整合进分裂和非分裂细胞而被广泛应用。本文将综述生产CAR-T细胞的最新进展和挑战,以及用于制备GMP级别CAR-T 的LVs的生产过程,概述CAR-T治疗的应用进展,特别强调下一代同种异体CAR-T细胞。
此系统将原来的一个包装质粒分成两个质粒:一个编码 rev基因 ,另一个编码 gag 和 pol基因,包装质粒与任何表达慢病毒载体没有显著同源性,最大程度减少三个基因同时整合的可能性。通过将转移质粒 5'LTR 的 U3 启动子区替换为来自 CMV 或 RSV 的强病毒启动子构建 tat 非依赖性的质粒,用异源启动子序列取代tat...
到目前为止,慢病毒载体的设计大约经历了以下几个阶段: ❶两质粒系统 以HIV-1为骨架,将其中的反式作用蛋白基因序列去除,然后包装成为含有目标基因的重组质粒和能够反式提供病毒颗粒所需蛋白的包装质粒,共转染包装细胞(如293T细胞)进行包装。但这个系统由于存在产生野生型HIV的危险,现在已经不再使用。
γ-逆转录病毒载体构建示意图 二、慢病毒载体 由于慢病毒载体(lentiviral vector)含有顺式作用元件中央多聚嘌呤区(central polypurine tract,cPPT)使其能有效感染静止 T 细胞。慢病毒载体转导效率接近100%,高于 γRV;转基因负荷量更大,可容纳 6.5 kb 的外源基因且基因毒性更小。这些优势让科研人员以极大的热情投入...
两位FDA官员称，目前获批的全部CAR-T产品所使用的T细胞在制备过程中均通过病毒转导方式转移基因构建体。目前这一代逆转录病毒载体仍存在通过基因组整合或其他机制导致癌症的可能性。例如，慢病毒载体会将自身基因组插入整合到宿主细胞基因组中，如果其插入位点在与癌症相关的DNA序列附近时，就可能导致癌症。两位FDA官员在...
我们设计了如下结构的靶向CD19抗原的FMC63 CAR分子,并将其构建慢病毒载体上,进行慢病毒制备。采用上述方法检测FMC63 CAR慢病毒滴度,病毒滴度约为:4.33×108TU/mL。 图6 FMC63 CAR分子结构 图7 FMC63 CAR慢病毒滴度检测结果 CAR-T细胞治疗展望 尽管当前CAR-T细胞治疗在毒副作用、耐药性等方面存在诸多挑战,药物...