CRISPR-Cas9 技术在研究基因功能方面特别重要。明确基因功能的办法有基因敲除、基因敲入以及基因突变分析之类的。CRISPR-Cas9 技术可以达成这些功能，给研究带来了高效又精准的工具。基因敲除是个常用的手段，把特定基因敲除掉来研究它的功能。凭借 CRISPR-Cas9 技术，科学家能够有选择地敲除他们感兴趣的基因，然后瞧瞧敲除...
目前，CRISPR-Cas9系统应用最为广泛，可对基因组DNA进行编辑，Cas9蛋白首先与crRNA及tracrRNA结合成复合物，通过PAM序列结合并侵入DNA，形成RNA-DNA复合结构，进而对目的DNA双链进行切割，使DNA双链断裂，并启动DNA损伤修复机制。CRISPR-Cas9技术在靶点验证、药物分子的高通量筛选、遗传性疾病的治疗等领域得到了广泛的应用。
由于CRISPR-Cas9 系统中的核酸内切酶切割特异性由 RNA 序列引导,因此通过对向导 RNA (gRNA) 序列进行工程改造,并将其与 Cas9 核酸内切酶一起递送至靶细胞内后,几乎可以对任何基因组位点进行编辑。 CRISPR 是如何工作的? CRISPR-Cas9 系统由非编码短 gRNA 和 Cas9 核酸酶组成(图 1)...
CRISPR-Cas9基因编辑技术主要有两种应用方式: 1.基因敲除(Knockout):通过CRISPR-Cas9在目标基因上引入双链断裂(DSB),细胞通过非同源末端连接(NHEJ)修复机制修复断裂,过程中可能引入插入或缺失(indels)突变,导致目标基因功能丧失。 2.基因插入或替换(Knockin):利用同源重组(HDR)机制,在目标基因上引入特定的突变或外源序...
CRISPR-Cas9是继ZFN、TALENs等基因编辑技术推出后的第三代基因编辑技术,短短几年内,CRISPR-Cas9技术风靡全球, 成为现有基因编辑和基因修饰里面效率最高、最简便、成本最低、最容易上手的技术之一,成为当今最主流的基因编辑系统。 一、什么是CRISPR-Cas系统 ...
图 1. 不同基因编辑手段的对比 2020 年，两位女性科学家 Emmanuelle Charpentier 和 Jennifer A. Doudna 因发现 CRISPR/Cas9 基因剪刀，而获得 2020 年诺贝尔化学奖。CRISPR/Cas 系统由一小段 RNA 和一种高效的 DNA 切割酶 （Cas 核酸酶） 组成的系统，该技术不像 TALENs 技术和 ZFNs 技术是依赖于蛋白与靶...
CRISPR/Cas系统是应用最广泛的基因组编辑技术。 由具有核酸内切酶功能的Cas蛋白和一条人为重组的一段目的基因的单链向导RNA(sgRNA)组成,sgRNA可以指导Cas蛋白对靶基因进行敲除、插入和突变修饰。 其中CRISPR/Cas9系统是研究最深入,应用最成熟的一种高效的基因编辑工具,主要...
riboEDIT™ CRISPR-Cas9是锐博自主开发的采用天然复合物系统的即用型(Ready-to-Use)基因编辑体系,gRNA采用crRNA和tracrRNA,提供全RNA体系(crRNA+tracrRNA+Cas9 mRNA)和RNP体系(crRNA+tracrRNA+Cas9 Protein),充分借助化学合成技术优势和质谱检测以确保质量稳定,通过化学转染、显微注射或电穿孔/电转进行编辑,是大规模文...
报道称，这种基因组编辑技术为在几乎所有生物体中的大量应用操作打开了大门。自2012年这一编辑技术由沙尔庞捷和杜德纳开发以来，CRISPR/Cas9已用于寻找针对多种疾病（包括癌症和艾滋病等）的新疗法，以及培育植物新品种等。为什么说这是革命性成果？报道称，这项技术可随意改变生物基因组。许多人将其称为基因编辑的“...