CRISPR/Cas9基因编辑技术研发及应用作为生物技术领域的重要突破，于2021年12月14日入选由中国工程院院刊《工程》（Engineering）组织评选的"2021全球十大工程成就"。该技术因能精准剪切DNA实现基因组修饰，被广泛称为"基因剪刀"，其应用涵盖遗传病治疗、肿瘤诊疗及动植物育种改良等多个领域。2020年诺贝尔化学奖
由于CRISPR-Cas9 系统中的核酸内切酶切割特异性由 RNA 序列引导,因此通过对向导 RNA (gRNA) 序列进行工程改造,并将其与 Cas9 核酸内切酶一起递送至靶细胞内后,几乎可以对任何基因组位点进行编辑。 CRISPR 是如何工作的? CRISPR-Cas9 系统由非编码短 gRNA 和 Cas9 核酸酶组成(图 1)。gRNA 有两...
1. CRISPR-Cas9系统的组成 2. CRISPR-Cas9的工作机制 CRISPR-Cas9基因编辑运用 客户文章:技术案例分享 CRISPR-Cas9技术服务流程 联系我们 基因编辑,即对生物体遗传物质进行精确和有针对性的修改,是分子生物学领域最重大的进展之一。从揭示基本的生物学过程到推动医学、农业和生物技术的发展均具有深远的应用。 CRISPR-...
2. CRIPSR基因座的表达:间隔区同源的外来核酸重新进入细菌,激活CRISPR阵列转录产生pre-crRNA,同时与pre-crRNA序列互补的tracrRNA也被转录出来,tracrRNA在转录后首先与Cas9蛋白结合,pre-crRNA和tracrRNA之间的互补碱基配对形成双链RNA,然后与Cas9结合形成复合物。 双链RNA与Cas...
我们将简单阐述CRISPR/Cas9技术的理论背景和主要应用,希望能对大家的研究有所启发。 (一)CRISPR系统介绍 CRISPR是“成簇规律间隔短回文重复序列”(clustered regularly interspaced short palindromic repeats)的缩写,原核生物(细菌和古生菌)利用它来防止噬菌体病毒的感染。其原理核心是使原核生物能够识别与噬菌体或其他...
可以通过cas9抗体来检测cas9核酸酶是否正常表达 HDR模板有质粒DNA,双/单链DNA片段等 2.sgRNA设计与制备 在靶标基因中找到PAM序列,PAM前的20个碱基核苷酸序列即为crRNA,PAM不包括在crRNA内,双链DNA的任意一条链都可以用作PAM序列,根据经验,crRNA序列的第一个碱基为G,第17个为A/T的sgRNA的基因编辑效率更好,为了...
CRISPR-Cas9 系统源自简单细菌免疫系统的组分,能够在多种细胞中进行靶向基因切割和基因编辑。 由于CRISPR-Cas9 系统中的核酸内切酶切割特异性由 RNA 序列引导,因此通过对向导 RNA (gRNA) 序列进行工程改造,并将其与 Cas9 核酸内切酶一起递送至靶细胞内后,几乎可以对任何基因组位点进行...
Cas9 蛋白质在 CRISPR 系统里属于特别关键的组成部分之一。这是一种由 RNA 引导的 DNA 切割酶，特异性和活性都很高。Cas9 蛋白质有两个关键的结构域：一个是 nuclease 域，另一个是 RNA 识别域。nuclease 域能把 DNA 链切断，RNA 识别域会跟引导 RNA（gRNA）产生相互作用，这样就能识别和定位特定的 DNA 序列...
CRISPR-Cas9基因编辑技术主要有两种应用方式: 1.基因敲除(Knockout):通过CRISPR-Cas9在目标基因上引入双链断裂(DSB),细胞通过非同源末端连接(NHEJ)修复机制修复断裂,过程中可能引入插入或缺失(indels)突变,导致目标基因功能丧失。 2.基因插入或替换(Knockin):利用同源重组(HDR)机制,在目标基因上引入特定的突变或外源序...
【图4】CRISPR/Cas9介导的重组工程 [3] 在重组工程中,我们是将线性DNA (单链或双链) 电转到含有λ-Red重组酶的宿主细胞中,线性DNA一旦进入细胞便会在重组酶的驱动下参与同源重组,λ-Red重组酶是在制备感受态细胞的过程中诱导表达的。 在CRISPR/Cas9介导的重组工程中,我们需要将线性DNA和组成型表达sgRNA的质粒一...