1. miRNA茎环法逆转录+miRNA荧光定量PCR 原理:在逆转录过程中我们需要设计一个茎环引物与我们miRNA序列结合起到延长miRNA的作用。而茎环引物是一个长度约为45bp且能够自身环化的引物。每一个miRNA都具有自己特异的茎环引物,这最重要的原因就是设计的茎环引物中包含一段与miRNA互补序列有关:茎环逆转录引物=5’端
逆转录 PCR 反应体系如下表: 5×PrimerScript Buffer 2 µL PrimerScript RT Enzyme Mix 0.5 µL Random 6 mers (100 µM) 0.5 µL Oligo dT Primer (50 µM) 0.5 µL Total RNA (500 ng/RNA的浓度) µL RNase Free dH 2 O 补至10 μL Total 10 µL 反应条件: 37 ℃,15 min...
实时荧光定量逆转录PCR(Real-time RT-PCR)是一种结合了逆转录PCR(RT-PCR)和实时荧光PCR(qPCR)的技术。它通过将mRNA或总RNA逆转录为cDNA,然后以cDNA为模板进行实时荧光PCR分析,从而实现定量检测基因表达水平。一、背景知识介绍 Real-time RT-PCR中的“RT”代表reverse transcription(逆转录),即利用mRNA或总RNA为模...
成熟miRNA的长度只有21~23nt,对miRNA进行qPCR定量时,无法直接对其进行正、反向引物的设计(通常正向引物就足以覆盖miRNA全长),但是可以通过增加逆转录产物长度来解决这一问题,miRNA的逆转录方法有两种,分别是茎环法和加尾法。 实时荧光定量PCR的概念 实时荧光定量PCR即Real-time PCR,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,...
逆转录荧光定量PCR(RT-qPCR)是一种基于荧光信号实时检测PCR扩增产物的技术,主要用于研究基因表达水平。RT-qPCR技术通常分为两部分,第一部分是逆转录反应(Reverse Transcription,RT),将RNA转录成cDNA;第二部分是PCR扩增反应,通过引物特异性扩增目标基因的cDNA,并结合荧光探针或荧光染料进行荧光信号检测。荧光信号的强度与...
逆转录酶活性检测主要采用基于PCR（聚合酶链式反应）的技术，其中最为常用的是RT-qPCR（逆转录定量PCR）方法。该方法包括以下主要步骤：RNA模板准备：通常以MS2 RNA或其他特定RNA为模板，这些RNA模板可以是病毒RNA的模拟物或已知序列的RNA。RNA逆转录：在逆转录酶的作用下，RNA模板被逆转录成cDNA（互补DNA）。PCR扩增...
promega 两步法逆转录和定量PCR(qPCR)简介 两步法逆转录和定量PCR(qPCR) GoTaq® 2-Step RT-qPCR System(GoTaq®两步法RT-qPCR系统)通过使用GoScript™逆转录系统和GoTaq® qPCR Master Mix,采用两步法RT-qPCR对RNA表达水平进行检测和相对定量。
日本TAKARA公司逆转录和定量PCR体系 逆转录PCR 反应体系如下表： 5×PrimerScript Buffer PrimerScript RT Enzyme Mix Random 6 mers (100 μM) Oligo dT Primer (50 μM) Total RNA RNase Free dH2O Total 反应条件：37 ℃，15 min逆转录反应；85 ℃，5 s逆转录酶的失活反应；4℃，反应结束，产物为cDNA...
Hieff Unicon® V Lyo-nCoV Multiplex One Step RT-qPCR Kit (with MgCl2) 是以 RNA 为模板进行多重定量 PCR 反应的试剂盒。在实验的过程中,逆转录和定量 PCR 在同一反应管中进行,简化了实验操作,降低了污染的风险。独特的 Buffer 和酶的设计,可用于一步法 RT-qPCR 冻干反应体系的配制和产品设计。 本试剂...
环锌指蛋白(RZFP)是一类植物在非生物逆境响应中发挥重要作用的转录因子,水稻OsRZFP34基因编码RZFP。研究人员采用逆转录定量PCR(qRT﹣PCR)技术分析了OsRZFP34在高温(42℃)、低温(4℃)和干旱( PEG)处理下的表达模式,胁迫处理样品的取样时间点为0、0.5、1、2、4、8、24h。下图是不同处理条件下的相对表达量。