4)逆转录:1ul茎环引物(stem-loop)+试剂盒中逆转录MIX(2ul+2ul)+free-RNase H2O(5ul)(to 20 ul) 5)一般来说,一次逆转录只能进行一个miRNA的单独逆转录,但是根据实际情况而言,我们可以将miRNA+内参U6混合在一管中一同逆转成cDNA。 根据以上试剂盒设计的加样量,我尝试过一管内混合逆转录内参+5个miRNA,其...
实时荧光定量逆转录PCR(Real-time RT-PCR)是一种结合了逆转录PCR(RT-PCR)和实时荧光PCR(qPCR)的技术。它通过将mRNA或总RNA逆转录为cDNA,然后以cDNA为模板进行实时荧光PCR分析,从而实现定量检测基因表达水平。一、背景知识介绍 Real-time RT-PCR中的“RT”代表reverse transcription(逆转录),即利用mRNA或总RNA为模...
🚀🚀🚀 1、使用5xA1l-in-One Reaction Mix for gPCR和TransScrip Uni All-in-One Enzyme Mix,仅需5分钟即可高效地将RNA合成第一链CDNA,同时去除基因组DNA。操作简便,降低操作过程中的污染机率。🌐🌐🌐 2、利用PerfectStart®Green qPCR SuperMix进行扩增,其扩增效率强,特异性高,灵敏度好,数据准确。...
逆转录荧光定量PCR(RT-qPCR)是一种基于荧光信号实时检测PCR扩增产物的技术,主要用于研究基因表达水平。RT-qPCR技术通常分为两部分,第一部分是逆转录反应(Reverse Transcription,RT),将RNA转录成cDNA;第二部分是PCR扩增反应,通过引物特异性扩增目标基因的cDNA,并结合荧光探针或荧光染料进行荧光信号检测。荧光信号的强度与...
一、miRNA 逆转录及实时荧光定量 PCR的概念 miRNA逆转录的概念 成熟miRNA的长度只有21~23nt,对miRNA进行qPCR定量时,无法直接对其进行正、反向引物的设计(通常正向引物就足以覆盖miRNA全长),但是可以通过增加逆转录产物长度来解决这一问题,miRNA的逆转录方法有两种,分别是茎环法和加尾法。
逆转录PCR(reverse transcription PCR)或者称反转录PCR(reverse transcription-PCR, RT-PCR),是聚合酶链式反应(PCR)的一种广泛应用的变形。它是一种以 RNA 为样本,RNA链被逆转录成为互补DNA(cDNA),再以…
产品名称 逆转录酶(reversetranscriptase)PERT荧光定量PCR检测试剂盒 产品规格 20次 有效成分含量 99% 是否进口 否 用途范围 仅用于科学实验研究使用 包装规格 盒装kg 检测方法 比色法 样本 组织,细胞,线粒体,细菌等 保质期 6个月 产地 上海 储存条件 冷藏或-20℃ 价格 客服报价为准 运输 快递...
逆转录酶活性检测主要采用基于PCR（聚合酶链式反应）的技术，其中最为常用的是RT-qPCR（逆转录定量PCR）方法。该方法包括以下主要步骤：RNA模板准备：通常以MS2 RNA或其他特定RNA为模板，这些RNA模板可以是病毒RNA的模拟物或已知序列的RNA。RNA逆转录：在逆转录酶的作用下，RNA模板被逆转录成cDNA（互补DNA）。PCR扩增...
逆转录 PCR 反应体系如下表: 5×PrimerScript Buffer 2 µL PrimerScript RT Enzyme Mix 0.5 µL Random 6 mers (100 µM) 0.5 µL Oligo dT Primer (50 µM) 0.5 µL Total RNA (500 ng/RNA的浓度) µL RNase Free dH 2 O 补至10 μL Total 10 µL 反应条件: 37 ℃,15 min...
对于qRT-PCR称呼有不同的形式,但总体上来说,实时定量反转录聚合酶链式反应(Real-Time Quantitative Reverse Transcription PCR)可能精细一些,毕竟qPCR仪器在采集数据的时候就是一种实时荧光数据收集,当然并不否认定量逆转录聚合酶链反应的称呼是错误的。 1.1 cDNA ...