RT-qPCR技术通常分为两部分,第一部分是逆转录反应(Reverse Transcription,RT),将RNA转录成cDNA;第二部分是PCR扩增反应,通过引物特异性扩增目标基因的cDNA,并结合荧光探针或荧光染料进行荧光信号检测。荧光信号的强度与PCR扩增产物cDNA数量成正比,可以用来定量目标基因的表达水平。 RT-qPCR技术在生物医学和农业科研中被...
实时荧光定量逆转录PCR(Real-time RT-PCR)是一种结合了逆转录PCR(RT-PCR)和实时荧光PCR(qPCR)的技术。它通过将mRNA或总RNA逆转录为cDNA,然后以cDNA为模板进行实时荧光PCR分析,从而实现定量检测基因表达水平。一、背景知识介绍 Real-time RT-PCR中的“RT”代表reverse transcription(逆转录),即利用mRNA或总RNA为模...
Real-time RT-PCR是qPCR和RT-PCR的组合,其中的“RT”是Reverse transcription(逆转录)的意思,所以RT-qPCR就是结合了荧光定量技术的逆转录PCR,即以mRNA或总RNA为模板,先反转录得到cDNA,再以cDNA为模板,通过荧光定量PCR进行定量检测分析。因为RT-PCR只可以定性,但不能进行定量分析。与RT-PCR一样,RT-qPCR定量分析R...
一管内即可逆转录多个miRNA的cDNA。 ②荧光定量(qPCR):使用通用荧光定量试剂盒 加尾法的上游引物(正向引物)设计: 例如hsa-miR-30b-5p的成熟序列为UGUAAACAUCCUACACUCAGCU,U全部换成T:TGTAAACATCCTACACTCAGCT即为加尾法的正向引物; 加尾法的qPCR反应体系跟普通的qPCR体系一样,程序也类似。但是如果一次做许多的mi...
定量逆转录聚合酶链反应(Quantitative reverse transcription polymerase chain reaction),也称为RT-qPCR,用于检测和定量RNA。在qPCR中,扩增产物的数量在每个PCR反应周期使用荧光值被测量。利用的底物或者模板是cDNA (complementary DNA, cDNA),而cDNA是Total RNA(总RNA)或mRNA首先转录合成。然后将cDNA用作qPCR或实时PCR反...
Hifair®V Universal Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit (UDG Plus)是以RNA为模板进行多重定量PCR反应的试剂盒。在实验的过程中,逆转录和定量PCR在同一反应管中进行,简化了实验操作,降低了污染的风险。 本试剂盒利用耐热Hifair®V Reverse Transcriptase高效合成第一链cDNA,并利用UNICON®HotStart Taq DNA ...
HERV类内源性逆转录病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒 HERV Probe qPCR Kit 产品及特点: 人类内源性逆转录病毒(HERV)是几百万年前整合到人类基因组中的逆转 录病毒的残余物,约占了整个基因组的 8%。大部分 HERV 元件在进化过程中由 于突变、缺失等的积累,已没有编码能力。但仍有少数由于正性选择的压力,完 ...
逆转录酶活性检测主要采用基于PCR（聚合酶链式反应）的技术，其中最为常用的是RT-qPCR（逆转录定量PCR）方法。该方法包括以下主要步骤：RNA模板准备：通常以MS2 RNA或其他特定RNA为模板，这些RNA模板可以是病毒RNA的模拟物或已知序列的RNA。RNA逆转录：在逆转录酶的作用下，RNA模板被逆转录成cDNA（互补DNA）。PCR扩增...
Hieff® Fast Cell Direct SYBR Green RT-qPCR Kit 适用于对各种动物细胞进行RNA提取(如cell line 化的贴壁细胞和悬浮细胞、原代培养细胞、各种干细胞、iPS 细胞等),无需提RNA,可直接进行qPCR表达分析,用时短,操作简单,出错率低,最短只需1.5小时就可高效完成从模板制备到反转录反应及基因表达分析等步骤。试剂盒...
real-time RT-PCR的中文名称是实时逆转录聚合酶链反应,是一种结合了逆转录(RT)和实时聚合酶链式反应(qPCR)的技术,用于从RNA样本中合成相应的cDNA,并在逆转录的同时实时监测和定量扩增特定的RNA序列。 应用: 实时RT-PCR常用于研究基因表达的定量水平、检测和定量RNA病毒、评估病原体感染等。它可以提供实时、定量的...