2、避免RNA酶的污染：在合成cDNA第一链时，应使用RNA酶抑制剂，进行RT-PCR时，用于合成cDNA第一链的RNA不会对PCR有影响，因此没有必要用碱或RNA酶处理；3、不同来源的逆转录酶均可较好地用于第一链cDNA的合成，但不同来源的逆转录酶反应温度有所不同。如来自鸟类成髓细胞瘤病毒（AMV）与来自鼠白血病毒莫勒尼...
逆转录-聚合酶链反应 (Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction，RT-PCR)的原理是：提取组织或细胞中的总RNA，以其中的mRNA作为模板，采用Oligo（dT）或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR扩增，而获得目的基因或检测基因表达。作用 RT-PCR使RNA检测的灵敏性提高了几个数量级，使一些极...
逆转录RT-PCR把以RNA为模板的cDNA合成(即 RNA的反转录)与cDNA 的 PCR 结合在一起,提供了一种基因表达检测、定量和 cDNA克隆的快速灵敏的方法。由于 cDNA 包括了编码蛋白的完整序列,而且不含内含子,只要略经改造便可直接用于基因工程表达和功能研究,因此RT-PCR成为目前获得目的基因的一种重要手段。 首先是在逆转...
原理是:提取组织或细胞中的总RNA,以其中的mRNA作为模板,采用Oligo(dT)或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR扩增,而获得目的基因或检测基因表达。RT-PCR使RNA检测的灵敏性提高了几个数量级,使一些极为微量RNA样品分析成为可能。习题:PT-PCR(逆转录PCR,就是对)反应体系中需要加入的酶和原料...
图1. 逆转录RT-PCR原理图 cDNA的合成是RT-PCR的重要环节。以mRNA为模板,在逆转录酶的催化下,随机引物、oligo(dT)或基因特异性引物的引导下合成互补的DNA( complementary DNA,cDNA),再按照普通PCR的方法用两条引物以cDNA为模板,则可扩增出不含内含子的可编码完整基因的序列。
逆转录PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR)相关知识点: 试题来源: 解析 以mRNA为原始模板进行的PCR。先将mRNA逆转录生成cDNA,然后再进行PCR扩增。逆转录反应所用引物为寡聚胸腺嘧啶核苷酸,合成出cDNA第一链,再采用特异引物,以cDNA第一链为模板进行PCR扩增,最后扩增到大量的目的DNA片段。 暂无解析...
逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)
RT-PCR可以通过一步RT-PCR方案或两步RT-PCR方案进行。 一步法 RT-PCR 一步式 RT-PCR 使 mRNA 靶标(最多 6 kb)进行逆转录,然后在单个试管中进行 PCR 扩增。需要注意的是,使用完整、高质量的 RNA 和序列特异性引物将产生最佳结果。 一旦选择了包含逆转录酶、Taq DNA 聚合酶和校对聚合酶的混合物的一步法...