RT-qPCR技术通常分为两部分,第一部分是逆转录反应(Reverse Transcription,RT),将RNA转录成cDNA;第二部分是PCR扩增反应,通过引物特异性扩增目标基因的cDNA,并结合荧光探针或荧光染料进行荧光信号检测。荧光信号的强度与PCR扩增产物cDNA数量成正比,可以用来定量目标基因的表达水平。 RT-qPCR技术在生物医
①逆转录(RT): 将提取的RNA按照试剂盒的体系配置好,该步骤我们只需提供RNA,其余逆转录引物、逆转录酶以及dNTPs包含在Mix中。一管内即可逆转录多个miRNA的cDNA。 ②荧光定量(qPCR):使用通用荧光定量试剂盒 加尾法的上游引物(正向引物)设计: 例如hsa-miR-30b-5p的成熟序列为UGUAAACAUCCUACACUCAGCU,U全部换成T:...
定量逆转录聚合酶链反应(Quantitative reverse transcription polymerase chain reaction),也称为RT-qPCR,用于检测和定量RNA。在qPCR中,扩增产物的数量在每个PCR反应周期使用荧光值被测量。利用的底物或者模板是cDNA (complementary DNA, cDNA),而cDNA是Total RNA(总RNA)或mRNA首先转录合成。然后将cDNA用作qPCR或实时PCR反...
2.qPCR反应条件 将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。 推荐循环条件: 1循环 50℃ for 2 min 预变性 1循环 95℃ for 10min PCR扩增 40循环 95℃ for 15s 60℃ for 60s 在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM 四、结果分析: 1.结果分析条件设定 直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪...
Hieff Unicon® V Lyo-nCoV Multiplex One Step RT-qPCR Kit (with MgCl2) 是以 RNA 为模板进行多重定量 PCR 反应的试剂盒。在实验的过程中,逆转录和定量 PCR 在同一反应管中进行,简化了实验操作,降低了污染的风险。独特的 Buffer 和酶的设计,可用于一步法 RT-qPCR 冻干反应体系的配制和产品设计。 本试剂...
promega 两步法逆转录和定量PCR(qPCR)简介 两步法逆转录和定量PCR(qPCR) GoTaq® 2-Step RT-qPCR System(GoTaq®两步法RT-qPCR系统)通过使用GoScript™逆转录系统和GoTaq® qPCR Master Mix,采用两步法RT-qPCR对RNA表达水平进行检测和相对定量。
Hifair® V C58P2 Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit (UDG Plus)是以 RNA 为模板进行多重定量 PCR 反应的试剂盒。在实验的过程中,逆转录和定量 PCR 在同一反应管中进行,简化了实验操作,降低了污染的风险。 本试剂盒利用耐热 Hifair® V Reverse Transcriptase 高效合成第一链 cDNA,并利用 UNICON® ...
逆转录酶活性检测主要采用基于PCR（聚合酶链式反应）的技术，其中最为常用的是RT-qPCR（逆转录定量PCR）方法。该方法包括以下主要步骤：RNA模板准备：通常以MS2 RNA或其他特定RNA为模板，这些RNA模板可以是病毒RNA的模拟物或已知序列的RNA。RNA逆转录：在逆转录酶的作用下，RNA模板被逆转录成cDNA（互补DNA）。PCR扩增...
实时荧光定量逆转录PCR(Real-time RT-PCR)是一种结合了逆转录PCR(RT-PCR)和实时荧光PCR(qPCR)的技术。它通过将mRNA或总RNA逆转录为cDNA,然后以cDNA为模板进行实时荧光PCR分析,从而实现定量检测基因表达水平。一、背景知识介绍 Real-time RT-PCR中的“RT”代表reverse transcription(逆转录),即利用mRNA或总RNA为模...
核心产品覆盖qPCR系列、NGS系列、逆转录系列、核酸提取与纯化系列、PCR系列、分子克隆系列、体外转录系列、抗体、蛋白纯化系列、蛋白分析系列、重组蛋白、细胞分析系列、细胞培养系列、细胞转染系列、报告基因检测系列等多个品类,广泛应用于生命科学研究、诊断检测和生物医药等领域。产品介绍 13894ES60多重定量PCR逆转录试剂...