印迹技术，作为将大分子（如蛋白质和核酸）从凝胶转移到固定膜上的过程，为检测这些转移分子提供了有效手段。这一技术起源于Southern的DNA印迹研究，随后又发展出了Northern blot（RNA印迹）和western blot（蛋白印迹）。Western blot技术，则以其独特的抗体识别机制，广泛应用于凝胶电泳分离的蛋白质的检测中。而在此之前...
免疫印迹，又被称为蛋白质印迹（Western blot，WB），是一种复合性的免疫学检测技术。该方法通过利用SDS-PAGE技术，在生物样本中将蛋白质分子根据其分子量在凝胶上进行分离，随后通过电转移的方式将这些蛋白质转移到固相膜上。固相膜上的蛋白质充当抗原，与相应的抗体发生免疫反应，接着与酶标记的第二抗体发生反应。...
整个操作在转移液中进行，要不断的擀去气泡。膜两边的滤纸不能相互接触，接触后会发生短路。整体顺序为“黑色电极—海绵—3层滤纸—凝胶—PVDF膜—3层滤纸—海绵—红色电极”。将夹子放入转移槽槽中，要使夹的黑面对槽的黑面，夹的白面对槽的红面。电转移时会产热，在槽的一边放一块冰来降温。一般用60 V转移2...
一、WB实验的基本原理：蛋白质免疫印迹(Western Blot)是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测的方法。一个基因表达终极结果是产生相应的蛋白质(或酶)。因此检测蛋白质是测定基因表达的主要标志，检测蛋白质的方法很多，除 ELISA 法外，也可用与检测 DNA 和 RNA 相类似的吸印方法。与Southern或Northern杂交方法...
一、实验原理Western Blot实验的原理是基于抗原-抗体反应的特异性。将样品中的蛋白质进行电泳分离后，转移到膜上，然后与特异性抗体进行孵育，形成抗原-抗体复合物。通过显色反应，可以检测出目标蛋白质的存在及其相对分子量。二、实验步骤1.样品准备：收集待检测的组织或细胞样品，用蛋白提取液提取蛋白质。2.电泳：将...
蛋白免疫印迹(Western Blot,简称WB)是一种能够从细胞或组织提取的复杂蛋白质混合物中检测靶蛋白并对其进行半定量的常用实验技术,还可以鉴定和定量蛋白质中翻译后修饰的氨基酸。与蛋白质科学中其他常用的分析技术(如ELISA、IHC、质谱法和显微镜观察等)相比,WB可提供有关蛋白质分子量信息,区分分子量相近的蛋白,适合检测...
一、蛋白免疫印迹(Western Blot)技术概览 蛋白免疫印迹(Western Blot,以下简称WB)是利用特定抗体能够专一结合其抗原“蛋白质”的原理来对样品进行着色,通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中的表达或修饰水平的免疫检测技术。 一般我们使用WB 都是为了半定量检测某种目的蛋白的相对表达量,通...
概述:蛋白质印迹法(免疫印迹试验)即 Western Blot,它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色,通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中表达情况的信息。目的:获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中...
基本原理 免疫印迹(Western Blot) 采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳,被检测物是蛋白质,“探针”是抗体,“显色”用标记的二抗。SDS-PAGE 可对蛋白质样品进行分离,转移到固相载体——例如硝酸纤维素薄膜(NC)上。固相载体可以吸附蛋白质,并保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。转移后的 NC 膜就称为一个印迹(blot...