一、WB实验的基本原理：蛋白质免疫印迹(Western Blot)是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测的方法。一个基因表达终极结果是产生相应的蛋白质(或酶)。因此检测蛋白质是测定基因表达的主要标志，检测蛋白质的方法很多，除 ELISA 法外，也可用与检测 DNA 和 RNA 相类似的吸印方法。与Southern或Northern杂交方法...
低丰度蛋白可能需要浓缩，以便于western blot检测。纯化标记(如HIS6标记)允许使用亲和柱(如镍)浓缩蛋白质。确保洗脱缓冲液与加载缓冲液兼容是很重要的。另外，如果有针对特定蛋白质的抗体，可以使用免疫沉淀等方法有效地浓缩蛋白质。蛋白质浓缩大型蛋白质制备通常需要在纯化步骤中进行浓缩步骤，以将材料体积减少到...
Western Blot 1 一、所需试剂... 2 1、SDS-PAGE凝胶配制试剂盒... 2 2、电泳液(可回收使用2次):配方见 三... 2 3、电转液:配方见 三... 2 4、TBST(4℃避光保存):配方见 三... 2 5、4X Laemmli样品缓冲液(-20℃保存)... 2 6、10-180kda 蛋白marker(-20℃保存1年,4℃ 3个月)... 2...
(Western Blot,WB ) 一 WB原理 印迹法(blotting) 是指将样品转移到固相载体上,而后利用相应的探测反应来检测样品的一种方法。 Western Blot采用的是变性聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳分离蛋白质混合物,经过SDS-PAGE分离的蛋白质被转移到固相支撑物(NC膜, PVDF膜等) 上后...
蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB ) 标签: western-blot 免疫印迹 蛋白质 蛋白质免疫印迹可应用于:(1)从蛋白质混合物中检出目标蛋白质;(2)定量或定性确 定细胞或组织中蛋白质的表达情况;(3)用于蛋白质-蛋白质、蛋白质-DNA、蛋白质RNA相互作用后续分析。 实验材料 蛋白质样品 试剂、试剂盒 裂解液 PBS SDS上...
免疫印迹,又被称为蛋白质印迹(Western blot,WB),是一种复合性的免疫学检测技术。该方法通过利用SDS-PAGE技术,在生物样本中将蛋白质分子根据其分子量在凝胶上进行分离,随后通过电转移的方式将这些蛋白质转移到固相膜上。固相膜上的蛋白质充当抗原,与相应的抗体发生免疫反应,接着与酶标记的第二抗体发生反应。最终,通...
(2)取10ul上清(现用现离心),加入蛋白胶中,跑胶的样一般加在中间,若有多的胶孔,中间样品和marker之间可以加一个1x loading,防止marker或者样品交叉了。 (3)80V电压跑浓缩胶,一般20分钟左右;120V电压跑分离胶50分钟左右,跑完为止。 2.转膜 (1)预先半小时将转膜Buffer放置在冰里预冷(埋起来),然后用甲醇将PV...
实验方法原理 Western免疫印迹(Western Blot)是将蛋白质转移到膜上,然后利用抗体进行检测的方法。对已知表达蛋白,可用相应抗体作为一抗进行检测,对新基因的表达产物,可通过融合部分的抗体检测。与Southern或Northern杂交方法类似,但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳,被检测物是蛋白质,“探针”是抗体,“显色”用标...
蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB )大概是我们进入实验室学习的第一个大实验,也是最常用的实验之一。虽然很基础,但是却必不可少。尽管WB的原理已铭记于心,但是真的跟着学长学姐一步步学习起来的时候还是难免觉得笨拙,尤其是结果还不尽如人意,到底是哪个环节出了BUG呢?本篇实验将由普健生物专业技术工程师为您讲解...