低丰度蛋白可能需要浓缩,以便于western blot检测。纯化标记(如HIS6标记)允许使用亲和柱(如镍)浓缩蛋白质。确保洗脱缓冲液与加载缓冲液兼容是很重要的。另外,如果有针对特定蛋白质的抗体,可以使用免疫沉淀等方法有效地浓缩蛋白质。蛋白质浓缩大型蛋白质制备通常需要在纯化步骤中进行浓缩步骤,以将材料体积减少到...
一、WB实验的基本原理:蛋白质免疫印迹(Western Blot)是将蛋白质转移到膜上,然后利用抗体进行检测的方法。一个基因表达终极结果是产生相应的蛋白质(或酶)。因此检测蛋白质是测定基因表达的主要标志,检测蛋白质的方法很多,除 ELISA 法外,也可用与检测 DNA 和 RNA 相类似的吸印方法。与Southern或Northern杂交方法...
目录 Western Blot 1 一、所需试剂... 2 1、SDS-PAGE凝胶配制试剂盒... 2 2、电泳液(可回收使用2次):配方见 三... 2 3、电转液:配方见 三... 2 4、TBST(4℃避光保存):配方见 三... 2 5、4X Laemmli样品缓冲液(-20℃保存)... 2 6、10-180kda 蛋白marker(-20℃保存1年,4℃ 3个月)....
1.准备样品,进行SDS-PAGE 聚丙烯酰胺凝胶电泳,电泳后不要染色,直接进行转膜。(SDS-PAGE样本制备及电泳参见号内文章《SDS-PAGE检测蛋白纯度和分子量protocol》、《SDS-PAGE电泳及Western试剂配制protocol》) 2.转膜:转一张膜需准备 6 张 7.0~8.3 cm 的滤纸和 1 张 7.3~8.6 cm 的硝酸纤维素膜。将切好的硝酸...
蛋白质免疫印迹(WesternBlot,WB)蛋白质免疫印迹(WesternBlot,WB) 6. 显色液:DAB 6.0 mg;0.01 M PBS 10.0 ml;硫酸镍胺 0.1 ml;H2021.0 μl。 二、蛋白样品制备 1. 单层贴壁细胞总蛋白的提取 (1) 倒掉培养液,并将瓶倒扣在吸水纸上使吸水纸吸干培养液(或将瓶直立放置一会儿使残余培养液流到瓶底然后再...
蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB )是很常规的生物学实验,是将蛋白质转移到膜上,然后利用抗体进行检测的方法。与Southern或Northern杂交方法类似,但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳,被检测物是蛋白质,“探针”是抗体,“显色”用标记的二抗。经过PAGE分离的蛋白质样品,转移到固相载体(例如硝酸纤维素薄膜)上,固...
实验原理 Western blot(也称为蛋白质免疫印迹)是一种常用于研究中分离和鉴定蛋白质的技术。它利用 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS-PAGE) 来分离指定样品中包含的各种蛋白质,然后将分离的蛋白质转移到硝酸纤维素或 PVDF 膜上,接下来将膜与对感目标蛋白质的特异抗体一起孵育。在洗膜过程中,未结合的抗体被洗掉,只留...
实验方法原理 Western免疫印迹,是将蛋白质转移到膜上,然后利用抗体进行检测的方法。对已知表达蛋 白,可用相应抗体作为一抗进行检测,对新基因的表达产物,可通过融合部分的抗体检测。 与Southern或Northern杂交方法类似,但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳,被 检测物是蛋白质,探针是抗体,显色用标记的二抗。 经过PA...
(Western Blot,WB ) 一 WB原理 印迹法(blotting) 是指将样品转移到固相载体上,而后利用相应的探测反应来检测样品的一种方法。 Western Blot采用的是变性聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳分离蛋白质混合物,经过SDS-PAGE分离的蛋白质被转移到固相支撑物(NC膜, PVDF膜等) 上后...
蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB )是很常规的生物学实验,是将蛋白质转移到膜上,然后利用抗体进行检测的方法。与Southern或Northern杂交方法类似,但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳,被检测物是蛋白质,“探针”是抗体,“显色”用标记的二抗。经过PAGE分离的蛋白质样品,转移到固相载体(例如硝酸纤维素薄膜)上,固...