蛋白质免疫印迹法,即Western Blot,是一种复合性的免疫学检测技术,基本原理是通过SDS-PAGE(聚丙烯酰胺凝胶电泳)对蛋白质样品进行分离,随后将其转移至固相载体,如硝酸纤维素薄膜(NC膜)或PVDF膜。固相载体以非共价键方式吸附蛋白质,同时能够保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性的不变性。在该过程中,固相载体上的蛋白质...
一、原理 蛋白质免疫印迹法即Western Blot。 它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法,基本原理是经过 PAGE(聚丙烯酰胺凝胶电泳)分离的蛋白质样品,转移到固相载体例如硝酸纤维素薄膜(NC膜)或PVDF膜上,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。 以固相载体...
一、WB实验的基本原理：蛋白质免疫印迹(Western Blot)是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测的方法。一个基因表达终极结果是产生相应的蛋白质(或酶)。因此检测蛋白质是测定基因表达的主要标志，检测蛋白质的方法很多，除 ELISA 法外，也可用与检测 DNA 和 RNA 相类似的吸印方法。与Southern或Northern杂交方法...
①实验设备和耗材准备 ②样品准备(蛋白定量) ③SDS-PAGE蛋白电泳 ④转膜 ⑤蛋白显色。 一、实验设备和耗材准备 1.1主要设备准备 1.2常用试剂的配制 1.3.准备所需抗体 1.3.1.一抗的选择:明确需要跑的指标,以CD63为例,在购买抗体时,蛋白购买网站(abcam...
一、实验原理 Western blot（也称为蛋白质免疫印迹）是一种常用于研究中分离和鉴定蛋白质的技术。它利用 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS-PAGE) 来分离指定样品中包含的各种蛋白质，然后将分离的蛋白质转移到硝酸纤维素或 PVDF 膜上，接下来将膜与对感目标蛋白质的特异抗体一起孵育。在洗膜过程中，未结合的抗体被...
一、实验原理Western Blot实验的原理是基于抗原-抗体反应的特异性。将样品中的蛋白质进行电泳分离后，转移到膜上，然后与特异性抗体进行孵育，形成抗原-抗体复合物。通过显色反应，可以检测出目标蛋白质的存在及其相对分子量。二、实验步骤1.样品准备：收集待检测的组织或细胞样品，用蛋白提取液提取蛋白质。2.电泳：将...
蛋白免疫印迹(Western Blot,WB)是将蛋白质经电泳分离后转移到膜上,然后利用抗体进行检测的技术。完整的WB流程,如下图所示,包含样本制备、SDS-PAGE、转膜、抗体结合、蛋白检测等5个大步骤。 样品制备 1、蛋白提取 1)融解RIPA裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1 mM。
1.实验器材 2.主要实验试剂 3.实验步骤 3.1 总蛋白提取 3.1.1.细胞样品加入400ml的裂解液（使用前数分钟内加入蛋白酶抑制剂）。设置匀浆程序进行匀浆；如果需要提高蛋白浓度，可以适量减少裂解液体积。3.1.2. 将匀浆完成的匀浆管取出，放置冰上裂解液30min，每隔 5min震荡一次确保组织完全裂解。3.1.3. ...
使用Western blot试剂盒进行显色反应。分析、比较并记录实验结果。此外，Western blot实验还包括蛋白样品制备、SDS-PAGE凝胶配制及电泳、转膜等关键步骤。在蛋白样品制备时，需使用适当的裂解液裂解细胞或组织，并通过离心收集上清液作为细胞裂解液，储存于-20℃。随后，为了确保上样量的一致性，需要测定每个蛋白样品的浓度...
蛋白印迹实验(免疫印迹实验)即Western Blot。它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中表达情况的信息。现已广泛应...