蛋白质免疫印迹法,即Western Blot,是一种复合性的免疫学检测技术,基本原理是通过SDS-PAGE(聚丙烯酰胺凝胶电泳)对蛋白质样品进行分离,随后将其转移至固相载体,如硝酸纤维素薄膜(NC膜)或PVDF膜。固相载体以非共价键方式吸附蛋白质,同时能够保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性的不变性。在该过程中,固相载体上的蛋白质...
我们的Western Blot实验方案包含蛋白提取、电泳、转膜、封闭、孵育抗体、检测(图1)及所涉及的试剂,为您的WB实验保驾护航。 图1、Western Blot实验步骤 ● 蛋白提取 1、使用Trident Extraction Kits从样本(细胞或组织)中提取蛋白。 (注:根据蛋白与抗体的具体情况优化细胞数量以及上样量) 2、蛋白浓度定量,在-20℃或...
1.实验器材 2.主要实验试剂 3.实验步骤 3.1 总蛋白提取 3.1.1.细胞样品加入400ml的裂解液（使用前数分钟内加入蛋白酶抑制剂）。设置匀浆程序进行匀浆；如果需要提高蛋白浓度，可以适量减少裂解液体积。3.1.2. 将匀浆完成的匀浆管取出，放置冰上裂解液30min，每隔 5min震荡一次确保组织完全裂解。3.1.3. 170...
简介:Western blot又称蛋白质免疫印迹实验,是分子生物学和免疫遗传学中广泛使用的分析技术,用于检测细胞分泌物或裂解物、组织匀浆或提取物样品中的特定蛋白质。实验的基础来源于物质分子量的不同(蛋白质电泳)和抗体特异性结合(ELISA)。实验步骤包括: ①实验...
蛋白免疫印迹(Western Blot,WB)是将蛋白质经电泳分离后转移到膜上,然后利用抗体进行检测的技术。完整的WB流程,如下图所示,包含样本制备、SDS-PAGE、转膜、抗体结合、蛋白检测等5个大步骤。 样品制备 1、蛋白提取 1)融解RIPA裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1 mM。
蛋白免疫印迹（Western Blot）Buffer的准备 1）准备甲醇和ddH2O；2）配制1× PBST：500 mL 1× PBS+0.25 mL tween 20；3）配制5%的BSA封闭液：2.5 g的BSA溶解到50 mL 1x PBST中；4）配制一抗，二抗：用5%的BSA封闭液按说明书推荐比例稀释(一般新买的培养基可以进一步稀释使用)；5）10× running buffer...
一、实验原理 Western blot（也称为蛋白质免疫印迹）是一种常用于研究中分离和鉴定蛋白质的技术。它利用 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS-PAGE) 来分离指定样品中包含的各种蛋白质，然后将分离的蛋白质转移到硝酸纤维素或 PVDF 膜上，接下来将膜与对感目标蛋白质的特异抗体一起孵育。在洗膜过程中，未结合的抗体被...
Western Blot 1 一、所需试剂... 2 1、SDS-PAGE凝胶配制试剂盒... 2 2、电泳液(可回收使用2次):配方见 三... 2 3、电转液:配方见 三... 2 4、TBST(4℃避光保存):配方见 三... 2 5、4X Laemmli样品缓冲液(-20℃保存)... 2 6、10-180kda 蛋白marker(-20℃保存1年,4℃ 3个月)... ...
Part1:实验方案 蛋白质免疫印迹(Western Blot)是利用抗原与抗体特异性结合的特点,采用聚丙烯酰胺凝胶电泳,经过PAGE分离的蛋白质样品,转移到固相载体,以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原,与对应的抗体起免疫反应,再与酶或同位素标记的第二抗体起反应,经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白...
蛋白质印迹(Western blotting):又称为免疫印迹,根据抗原抗体的特异性结合,半定量检测样品中的某种蛋白的方法。基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。通过分析条带的位置和条带深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中表达情况。