2)电转缓冲液:Western Blot电泳电转通用缓冲液(20329ES03),或参考Tris-Glycine缓冲液配方 3)蛋白上样缓冲液:5XSDS-PAGE蛋白上样缓冲液(20315ES05),或参考配方1X:0.25MTris-HCL(pH6.8), 10%(W/V)SDS, 0.5%(W/V) BPB(溴酚蓝), 50%(V/V) 甘油, 5%(W/V)β-巯基乙醇(2-ME)/DTT 4)其他缓冲液...
我们的Western Blot实验方案包含蛋白提取、电泳、转膜、封闭、孵育抗体、检测(图1)及所涉及的试剂,为您的WB实验保驾护航。 图1、Western Blot实验步骤 ● 蛋白提取 1、使用Trident Extraction Kits从样本(细胞或组织)中提取蛋白。 (注:根据蛋白与抗体的具体情况优化细胞数量以及上样量) 2、蛋白浓度定量,在-20℃或...
没有条带首先利用丽春红对膜染色,若有条带在,就说明是转膜后面的封闭一抗二抗操作有问题,我们可通过调节后面的实验条件,重新对膜进行处理,最后还是没出不排除一抗有问题;若丽春红染色没有条带,则可以放弃此膜,转膜前面的步骤哪里出错,有可能蛋白浓度低或蛋白未提出。
简介:Western blot又称蛋白质免疫印迹实验,是分子生物学和免疫遗传学中广泛使用的分析技术,用于检测细胞分泌物或裂解物、组织匀浆或提取物样品中的特定蛋白质。实验的基础来源于物质分子量的不同(蛋白质电泳)和抗体特异性结合(ELISA)。实验步骤包括: ①实验...
Part1:实验方案 蛋白质免疫印迹(Western Blot)是利用抗原与抗体特异性结合的特点,采用聚丙烯酰胺凝胶电泳,经过PAGE分离的蛋白质样品,转移到固相载体,以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原,与对应的抗体起免疫反应,再与酶或同位素标记的第二抗体起反应,经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白...
蛋白质免疫印迹法即Western Blot。 它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法,基本原理是经过 PAGE(聚丙烯酰胺凝胶电泳)分离的蛋白质样品,转移到固相载体例如硝酸纤维素薄膜(NC膜)或PVDF膜上,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。
Western blot 或蛋白质免疫印迹是一种常规蛋白分析技术。抗体-抗原相互作用的特异性实现了复杂蛋白质混合物中的靶蛋白识别。在这里,您可以获取常用的蛋白质电泳、western blot 缓冲液和保存液的详细配方,以及适用于化学发光和荧光法检测的通用蛋白质印迹方案,帮助您顺...
蛋白质印迹（或免疫印迹）分析程序可从复杂混合物（例如细胞或组织提取物）中鉴定和定量单个蛋白质。 通常，该技术涉及在变性条件下通过凝胶电泳分离蛋白质，从凝胶上将蛋白质电泳转移或“印迹”到固体支持膜，用对目标蛋白质具有特异性的抗体探测该膜，然后观察结合的抗体 使用标记的第二免疫试剂。 因此，蛋白质...
蛋白免疫印迹（Western Blot）Buffer的准备 1）准备甲醇和ddH2O；2）配制1× PBST：500 mL 1× PBS+0.25 mL tween 20；3）配制5%的BSA封闭液：2.5 g的BSA溶解到50 mL 1x PBST中；4）配制一抗，二抗：用5%的BSA封闭液按说明书推荐比例稀释(一般新买的培养基可以进一步稀释使用)；5）10× running buffer...
一、WB实验的基本原理：蛋白质免疫印迹(Western Blot)是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测的方法。一个基因表达终极结果是产生相应的蛋白质(或酶)。因此检测蛋白质是测定基因表达的主要标志，检测蛋白质的方法很多，除 ELISA 法外，也可用与检测 DNA 和 RNA 相类似的吸印方法。与Southern或Northern杂交方法...