2)电转缓冲液:Western Blot电泳电转通用缓冲液(20329ES03),或参考Tris-Glycine缓冲液配方 3)蛋白上样缓冲液:5XSDS-PAGE蛋白上样缓冲液(20315ES05),或参考配方1X:0.25MTris-HCL(pH6.8), 10%(W/V)SDS, 0.5%(W/V) BPB(溴酚蓝), 50%(V/V) 甘油, 5%(W/V)β-巯基乙醇(2-ME)/DTT 4)其他缓冲液...
一、原理 蛋白质免疫印迹法即Western Blot。 它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法,基本原理是经过 PAGE(聚丙烯酰胺凝胶电泳)分离的蛋白质样品,转移到固相载体例如硝酸纤维素薄膜(NC膜)或PVDF膜上,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。 以固相载体...
Part1:实验方案 蛋白质免疫印迹(Western Blot)是利用抗原与抗体特异性结合的特点,采用聚丙烯酰胺凝胶电泳,经过PAGE分离的蛋白质样品,转移到固相载体,以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原,与对应的抗体起免疫反应,再与酶或同位素标记的第二抗体起反应,经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白。
①实验设备和耗材准备 ②样品准备(蛋白定量) ③SDS-PAGE蛋白电泳 ④转膜 ⑤蛋白显色。 一、实验设备和耗材准备 1.1主要设备准备 1.2常用试剂的配制 1.3.准备所需抗体 1.3.1.一抗的选择:明确需要跑的指标,以CD63为例,在购买抗体时,蛋白购买网站(abcam...
Western Blot 1 一、所需试剂... 2 1、SDS-PAGE凝胶配制试剂盒... 2 2、电泳液(可回收使用2次):配方见 三... 2 3、电转液:配方见 三... 2 4、TBST(4℃避光保存):配方见 三... 2 5、4X Laemmli样品缓冲液(-20℃保存)... 2 6、10-180kda 蛋白marker(-20℃保存1年,4℃ 3个月)... ...
蛋白免疫印迹(Western Blot,简称WB)是一种能够从细胞或组织提取的复杂蛋白质混合物中检测靶蛋白并对其进行半定量的常用实验技术,还可以鉴定和定量蛋白质中翻译后修饰的氨基酸。与蛋白质科学中其他常用的分析技术(如ELISA、IHC、质谱法和显微镜观察等)相比,WB可提供有关蛋白质分子量信息,区分分子量相近的蛋白,适合检测...
蛋白免疫印迹（Western Blot）Buffer的准备 1）准备甲醇和ddH2O；2）配制1× PBST：500 mL 1× PBS+0.25 mL tween 20；3）配制5%的BSA封闭液：2.5 g的BSA溶解到50 mL 1x PBST中；4）配制一抗，二抗：用5%的BSA封闭液按说明书推荐比例稀释(一般新买的培养基可以进一步稀释使用)；5）10× running buffer...
Western blot 或蛋白质免疫印迹是一种常规蛋白分析技术。抗体-抗原相互作用的特异性实现了复杂蛋白质混合物中的靶蛋白识别。在这里,您可以获取常用的蛋白质电泳、western blot 缓冲液和保存液的详细配方,以及适用于化学发光和荧光法检测的通用蛋白质印迹方案,帮助您顺...
四、把蛋白质从凝胶转移到膜 膜可以是硝酸纤维素或PVDF，两者各具优点。用甲醇活化PVDF约1分钟，并在制备堆叠体之前用转膜缓冲液对PVDF进行冲洗。实验过程中需要对时间和电压进行优化（依据设备）。在封闭步骤之前采用丽春红染色法检查转膜，所得膜可用于抗体染色。五、抗体的染色1.用5%封闭溶液在室温条件下封闭膜...
Western Blot实验相信是很多生物科研小伙伴的常做实验,抱着一颗想要做出一张完美漂亮WB图的小小心愿,最后显影可能还是一场空的辛酸血泪史,操作流程看似简单,但是却环环相扣,抗体选择,试剂选择每一步没有做好,可能都会使我们的愿望化为泡影,今天小编就来整理一下WB实验整体的实验流程。