1.确定蛋白质的纯度：SEC测定技术可以快速分离蛋白质和其他杂质，如亚单位、聚合物、寡聚体等，从而确定蛋白质样品的纯度水平。例如，在一项药物研发过程中，研究人员使用SEC技术分析了重组蛋白样品的纯度。结果显示，SEC图谱呈现了明显的峰状分离，蛋白质峰对应的吸光度信号较高，表明样品中存在较高纯度的蛋白质。2....
蛋白变性SEC分析 蛋白变性SEC分析 SEC（Size Exclusion Chromatography）尺寸排阻色谱是一种高分子量物质分离分析技术，是所有色谱技术中最温和的一种液相色谱，也称为体积排阻色谱、分子筛色谱或凝胶过滤色谱，在蛋白质分离纯化分析中广泛使用。SEC实现蛋白质分离的技术原理是大小不同的蛋白质流经填充多孔球形颗粒的凝胶...
SDS十二烷基磺酸钠(Sodium dodecyl sulfate) 是可以用于流动相的一种蛋白变性剂,比如,以0.5%的浓度用于体积排阻色谱柱可以防止蛋白质在溶液中生成聚集体,帮助蛋白质保持统一的棒状构型,从而获得更理想的SEC分离以及更准确的分子量计算。然而,在反相填料上,SDS是作为离子对试剂使用的,它会结合在固定相上,减缓多肽的洗脱...
蛋白质SEC的现成校准标准品 校准混合物应包含与分析样品分子相似的分子。尺寸排阻色谱法根据分子的流体动力学大小分离分子，这取决于水合壳的厚度。给定溶剂中的分子水合度由分子特征（如极性）决定。通常，聚乙二醇因其单分散性而用作标准品。用于校准的分子应该每个峰对应于一个分子量。此外，聚乙二醇非常稳定，可以...
蛋白电泳SEC 蛋白质凝胶电泳和SEC(Size Exclusion Chromatography)尺寸排阻色谱技术都是蛋白质分析中常用的技术方法,二者基于不同的原理可以实现蛋白质组分的分离与纯度鉴定,还可以检测蛋白质的相对分子质量。 凝胶电泳技术可以进一步分为十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、等电点聚焦电泳(IEF)和二维凝胶电泳(...
SEC 是一种非常有效的蛋白质分析方法，由于温和的分离条件可获得高分辨率分离，因此它可以根据蛋白质样品的真实大小进行分离分析，与其他尺寸分离技术（如超滤或透析）相比，这是一个很大的优势。经色谱柱分离后的蛋白组分通过检测器进行检测可以得到其体积与吸收峰的色谱图，因此还可以用于蛋白的含量分析。SEC可实现蛋白...
SEC-HPLC进行蛋白纯度分析时出现蛋白粘柱子是因为蛋白与柱填料发生了可逆或不可逆的相互作用,导致峰展宽、拖尾甚至不出峰等现象,影响蛋白的准确定量。为了解决这一问题,可以在流动相中添加减少相互作用的添加剂,例如提高盐浓度、添加精氨酸和有机溶剂等。
sec蛋白家族的功能Sec蛋白家族是内质网膜上的蛋白质通道的重要组成部分,具有将未折叠或不完全折叠的蛋白质转运到内质网腔的功能。如果Sec发生突变,通道的功能可能会受到影响,导致蛋白质不能正常转运到内质网腔。具体而言,在Sec发生突变的酵母中,正常定位在高尔基体中的蛋白可能会发生无法折叠的错误折叠、聚集或者停滞在...
体积排阻色谱 (SEC) 是治疗性蛋白药物聚集体和片段分析的强大工具1-3。 SEC是一种非保留分离模式,分析物基于自身流体动力学尺寸:由大到小,依次洗脱。 对于治疗性蛋白药物,聚集体在单体之前洗脱,片段在单体后洗脱。 △图1 聚集体、单体和片段依次流出
体积排阻色谱法(SEC)已很好地用于蛋白质表征。从重组蛋白用于制药的早期发展开始,该技术就被用于生物制品的质量控制,并且该方法也不断地改进。如今,业内针对特定分离任务和即用标准开发了 (U) HPLC色谱柱,有助于促进方法开发并提高SEC方法的稳健性。 每当样品包含需要根据大小进行分离和表征的分子时,都可以使用分析...