蛋白变性SEC分析 SEC(Size Exclusion Chromatography)尺寸排阻色谱是一种高分子量物质分离分析技术,是所有色谱技术中最温和的一种液相色谱,也称为体积排阻色谱、分子筛色谱或凝胶过滤色谱,在蛋白质分离纯化分析中广泛使用。SEC实现蛋白质分离的技术原理是大小不同的蛋白质流经填充多孔球形颗粒的凝胶色谱柱的速度不同。 蛋...
高浓度磷酸盐流动相通常用于抑制蛋白质与SEC柱的结合。然而,磷酸盐是一种强盐析电解质,甚至比NaCl更强,这意味着高浓度的磷酸盐可能会以类似于NaCl的方式促进蛋白质吸附。下图是使用硅基填料的SEC柱子在不同磷酸盐浓度缓冲液中的蛋白回收率,可以看到在100-200mM浓度下是最适浓度。 氨基酸添加 有文献报道在流动相中...
SEC 是一种非常有效的蛋白质分析方法，由于温和的分离条件可获得高分辨率分离，因此它可以根据蛋白质样品的真实大小进行分离分析，与其他尺寸分离技术（如超滤或透析）相比，这是一个很大的优势。经色谱柱分离后的蛋白组分通过检测器进行检测可以得到其体积与吸收峰的色谱图，因此还可以用于蛋白的含量分析。SEC可实现蛋白...
最常见的凝胶过滤色谱应用是蛋白聚集体的分析。此类分析需要保持分析物的天然状态,因此流动相缓冲液的pH应为7左右,及适度的盐浓度。方法开发可以100mM的磷酸盐缓冲液(pH 6.8)为起点,并根据情况进行优化调整。 如果是疏水蛋白,则可加入5-10%有机溶剂,如甲醇、乙腈、异丙醇等。 如果是易于离子化的蛋白,如碱性蛋白...
SEC应用于生物制药的QC分析，主要目的是定量样品组分，而不是确定分子量。对于这类的SEC分析，蛋白质标准溶液加样通常用于系统适用性测试。蛋白质标准品是帮助您制备系统适用性样品的便利工具。色谱柱校准 在校准色谱柱时，使用与分析时相同的条件十分重要。更改缓冲体系会显著改变保留时间。例如，精氨酸是用于单克隆抗体...
SEC 是一种非常有效的蛋白质分析方法,由于温和的分离条件可获得高分辨率分离,因此它可以根据蛋白质样品的真实大小进行分离分析,与其他尺寸分离技术(如超滤或透析)相比,这是一个很大的优势。经色谱柱分离后的蛋白组分通过检测器进行检测可以得到其体积与吸收峰的色谱图,因此还可以用于蛋白的含量分析。SEC可实现蛋白质...
SEC作为一种分离分析技术，已广泛应用于各种大分子复合物（如糖、多肽、蛋白质、沥青、丁基橡胶、聚乙烯、聚苯乙烯以及硅聚合物等）的分离以及表征，如摩尔质量分布（Mw）、体积以及含量表征等。通常，通过适当选择合适的凝胶和柱长，可以分离分子量相似的分子。此外还可利用SEC从无机和可电离物质中分离生物来源的大...
因其操作简单、灵敏度高和分离速度快,能有效分离不同大小的聚集体,SEC是表征蛋白类药物聚集体的有效方法。同时,SEC在监测蛋白类药物的稳定性和降解模式方面也发挥着重要作用,对于指导蛋白类药物筛选及纯化工艺的开发具有重要意义。 SEC工作流程:HPLC-SEC系...
体积排阻色谱 (SEC) 是治疗性蛋白药物聚集体和片段分析的强大工具1-3。 SEC是一种非保留分离模式,分析物基于自身流体动力学尺寸:由大到小,依次洗脱。 对于治疗性蛋白药物,聚集体在单体之前洗脱,片段在单体后洗脱。 △图1 聚集体、单体和片段依次流出
蛋白变性SEC分析SEC(Size Exclusion Chromatography)尺寸排阻色谱是一种高分子量物质分离分析技术,是所有色谱技术中最温和的一种液相色谱,也称为体积排阻色谱、分子筛色谱或凝胶过滤色谱,在蛋白质分离纯化分析中广泛使用。SEC实现蛋白质分离的技术原理是大小不同的蛋白质流经填充多孔球形颗粒的凝胶色谱柱的速度不同。蛋白...