蓝白斑筛选的原理是什么?相关知识点: 试题来源: 解析 利用α互补现象进行筛选,Lacz ’ 基因编码的α肽链同失去了正常氨基末端的 β— 半乳糖苷酶突变体的互补现象称为 α 互补。由α 互补形成的有功能的 β— 半乳糖苷酶能将无色底物X-gal切割成半乳糖和深色的5-溴-4-靛蓝而显色出来。因此,任何携带有Lacz...
蓝白斑筛查它是一种关于基因发面的筛查,也是重组子筛查的一种,通常蓝白筛查和抗性筛查是一起的,它的原理一般是靠一些载体所带有的编码区,然后构建重组子,对这些重组子的筛查就是蓝白斑筛查。 本内容不能作为治疗依据,如有不适请到医院进行科学治疗
一、蓝白斑筛选原理 蓝白斑筛选是一种基于重组DNA分子在细菌培养基上产生蓝色或白色斑点的表型特征进行筛选的方法。在含有X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-半乳糖苷)的培养基上,携带β-半乳糖苷酶基因的重组分子会产生蓝色斑点,而没有β-半乳糖苷酶基因的分子则产生白色斑点。因此,通过观察菌落的颜色,可以快速、简...
当有外源DNA插入片段后,lacZ失活,丧失了分解X-Gal的能力,形成白色菌斑。重组体为白斑,非重组体为蓝斑,称细菌的蓝白斑筛选法。反馈 收藏
蓝白斑筛选法可能是使用最为广泛的用来筛选含插入片段的目的菌落的方法,除此以外还有一些其他的筛选方法。有些质粒上编码一个致死基因,克隆片段插入到该基因中的MCS则扰乱该致死基因的表达,理论上可以使存活的菌落均含成功克隆的质粒,例如ccdB基因系统。这和蓝白斑筛选中 肽的DNA干扰相似。抗生素选择同样被与之结合使...
默克生命科学实验分享｜蓝白斑筛选和菌落筛选实验方案 重组细菌鉴定蓝白斑筛选是一种快速有效的重组细菌鉴定技术，依赖于β-半乳糖苷酶的活性。β-半乳糖苷酶是一种在大肠杆菌中出现的酶，将乳糖切割成葡萄糖和半乳糖。破坏LACZ 基因周围环境中乳糖的存在触发了大肠杆菌中的lacZ操纵子。操纵子的活性导致产生代谢乳糖的...
简述蓝白斑筛选的基本原理。相关知识点: 试题来源: 解析 答:某些质粒带有大肠杆菌的半乳糖苷酶基因片段,在半乳糖苷酶基因的基因区外又另外引入了一段含多种单一限制酶位点的DNA序列。这些位点上如果没有克隆外源性DNA片段,在质粒被导入lac-的大肠杆菌后,质粒携带的半乳糖苷酶基因将正常表达,与大肠杆菌的半乳糖苷...
答:蓝白斑筛选就是利用α-互补(alpha complementation):pUC质粒带有大肠杆菌β-半乳糖苷酶基因的一个片段LacZ基因,它编码β-半乳糖苷酶的一个片段,而宿主细胞能编码与这个片段互补的β-半乳糖苷酶的另一部分,实现互补,形成完整的β-半乳糖苷酶,此酶能分解发色底物X-gal,形成蓝色菌落。当外源基因插入后,LacZ基因...
1、什么是蓝/白斑筛选,怎么进行蓝/白斑筛选载体pGEMZ在-半乳糖苷酶(lacZ)的-肽编码区内具有多克隆区域。在重组质粒中插入片段使-肽失活,可在指示平板上通过颜色筛选鉴别。不带有插入片段的载体,表达有功能的-半乳糖苷酶,所用的宿主菌在染色体或附加体上缺失掉lacZM15基因,导致内源-肽失活。载体pGEMZ或其它含...