原理一:筛网孔径 蓝白斑筛选的第一个原理是筛网孔径。筛网的孔径大小直接影响了筛选效果。当物料通过筛网时,只有小于筛网孔径的颗粒才能通过,大于筛网孔径的颗粒将被阻挡。因此,通过控制筛网的孔径大小,可以实现对物料的筛选分级。 原理二:筛网振动 筛网振动是蓝白斑筛选的关键原理之一。筛网在振动的作用下,可以使物料在...
解析 根据β-半乳糖苷酶显色反应筛选含有外源DNA插入序列的重组体克隆。原理:当外源DNA插入到载体lacZ基因上,导致β-半乳糖苷酶基因失活,因此大肠杆菌转化子菌落在添加有X-gal(IPTG诱导作用下)培养基中的颜色由蓝色变成白色菌落,可以通过直接观察这一颜色变化进而筛选并确定含有外源DNA插入序列的重组体克隆。
蓝白斑筛选的原理是什么?相关知识点: 试题来源: 解析 利用α互补现象进行筛选,Lacz ’ 基因编码的α肽链同失去了正常氨基末端的 β— 半乳糖苷酶突变体的互补现象称为 α 互补。由α 互补形成的有功能的 β— 半乳糖苷酶能将无色底物X-gal切割成半乳糖和深色的5-溴-4-靛蓝而显色出来。因此,任何携带有Lacz...
蓝白斑筛选是重组子筛选的一种方法:是根据载体的遗传特征筛选重组子,如α-互补、抗生素基因等。现在使用的许多载体都带有一个大肠杆菌的DNA的短区段,其中有β-半乳糖苷酶基因(lacZ)的调控序列和前146个氨基酸的编码信息。在这个编码区中插入了一个多克隆位点(MCS),它并不破坏读框,但可使少数几个氨基酸插入到β...
简述蓝白斑筛选的原理。相关知识点: 试题来源: 解析 答案要点: α互补:E.coli β-半乳糖苷酶的两个无活性的片段组合而成为功能完整的酶的过程。(1’) pGEM-T载体上的poly-T位点位于可产生α肽段的lac-Z基因位点之内。若有外源基因插入此则破坏编码读框产生没有活性的α肽段。(1’) 宿主菌为缺失产生α肽...
一、基因分析原理 蓝白斑筛选的基因分析原理,是利用小分子染料染色作为检测特定基因的标记,并将染料按照染色度进行分类,用以鉴定基因位点。当特殊小分子染料结合DNA上的某些特定位点时会发生发光,因此可以通过测量染料发光程度来确定DNA中特定位点是否在变化。而蓝白斑筛选就是以这一原理为基础进行筛选,从而发现新的变异...
答:基因工程中蓝白筛选的原理:突变的E.coli宿主(lac-)仅表达该酶的w片段。单独存在β-半乳糖苷酶的α片段或w片段都没有酶的活性,只有携带α片段基因的M13进入宿主细胞,宿主细胞才能同时表达α和o片段,产生有活性的β-半乳糖苷酶,使特异性底物变为蓝色化合物,这就是α互补。当外源基因的插入位点设计在LacZ基因...
病情分析:蓝白色斑点的筛选是基因工程中常用的细菌重组体的筛选方法。野生型埃希氏大肠杆菌产生的-半乳糖苷酶可将无色化合物物X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚--D-半乳糖苷)切割成半乳糖和深蓝色物质5-溴-4-靛蓝。5-溴-4-靛蓝可以使整个菌落变成蓝色。人工插入外源基因后,突变大肠杆菌的-半乳糖苷酶基因被插入的外...